搜索结果: 1-15 共查到“知识库 家畜病毒学 猪瘟病毒”相关记录53条 . 查询时间(0.073 秒)
非洲猪瘟病毒pS273R蛋白水解酶单克隆抗体制备
非洲猪瘟病毒 S273R蛋白 原核表达 单克隆抗体
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2021/3/30
本研究旨在制备非洲猪瘟病毒（ASFV） S273R蛋白的特异性单克隆抗体。本研究以原核表达的非洲猪瘟病毒重组S273R蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞。结果显示：基于纯化的S273R蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆，获得了4株可稳定分泌抗ASFV S273R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并通过免疫印迹（Western blot）和免疫荧...
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针，经优化反应条件，建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法，验证方法的敏感性、特异性和稳定性，对50份临床样品进行检测，并与猪瘟国标方法及OIE...
非洲猪瘟病毒强免疫原性重组CD2v抗原的制备与初步应用
非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白 强免疫原性抗原 初步应用
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2021/3/11
旨在获得非洲猪瘟病毒（ASFV）强免疫原性重组CD2v抗原，利用生物信息学软件进行CD2v抗原指数分析，将其细胞质内免疫显性区与类弹性蛋白多肽（ELP）在重组大肠杆菌中进行融合表达，对ELP-CD2v融合蛋白的相变循环（ITC）条件进行优化，在优化条件下进行融合蛋白纯化，利用烟草蚀纹病毒（TEV）蛋白酶活性包涵体切除ELP标签，通过免疫转印法对重组CD2v抗原进行鉴定，利用重组CD2v抗原建立EL...
猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心，猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室（以下简称：参考实验室）承担了国家认证认可监督管理委员会（以下简称“认监委”）组织的A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”（CNCA-19-A01），全面考察和评价我国动物疫病检测机构对猪瘟病毒抗体的检测能力。参考实验室负责制备检测样品，并进行随机编号。向每个参试实...
猪瘟病毒通过网格蛋白介导的内吞途径入侵ST细胞
猪瘟病毒 入侵 网格蛋白 内体
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2017/3/14
病毒入侵易感细胞是病毒建立感染的必要过程，猪瘟病毒如何入侵易感细胞尚未明确。笔者对猪瘟病毒入侵细胞与网格蛋白介导的内吞途径的关系进行了初步研究。通过利用抑制剂氯丙嗪和Dynasore及shRNA技术，对网格蛋白及动力蛋白功能进行抑制，干扰网格蛋白介导的内吞途径，发现猪瘟病毒的细胞入侵效率明显下降；通过利用内体酸化抑制剂NH4Cl及shRNA技术下调内体标志蛋白Rab5和Rab7的表达量，发现内体酸...
猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析
猪瘟病毒 复合多表位抗原基因 融合表达 活性分析
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2013/12/2
体外表达猪瘟病毒（CFSV）T、B细胞表位，并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因, 并将该基因插入pGEX6P1表达载体，经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆，成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEXBT500，转化E. coli BL21，IPTG诱导表达，纯化表达产物并免疫兔。结果：通过IPTG诱导目的基因可高...
猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析
猪瘟病毒 复合多表位抗原基因 融合表达 活性分析
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2012/3/21
体外表达猪瘟病毒（CFSV）T、B细胞表位，并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因, 并将该基因插入pGEX6P1表达载体，经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆，成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEXBT500，转化E. coli BL21，IPTG诱导表达，纯化表达产物并免疫兔。结果：通过IPTG诱导目的基因可高...
猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立
猪瘟病毒 野毒株 兔化弱毒疫苗株 RT-PCR-RFLP
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2013/12/2
本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物，建立猪瘟病毒 RT-PCR-RFLP检测方法；对20份疑似猪瘟临床样品进行检测，并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析，验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825 bp，产物经RFLP分析，野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322 bp和503 ...
一种用于非洲猪瘟病毒检测的PCR方法
聚合酶链式反应 非洲猪瘟 诊断
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2013/12/3
基于非洲猪瘟病毒（ASFV）VP72基因设计引物，建立一种检测非洲猪瘟病毒的PCR方法。应用本研究所建立的方法与OIE参考的方法进行比较，并对参考实验室提供的非洲猪瘟病毒17个分离株的基因组以及本实验室收集的野外样品进行检测。结果显示：本研究设计的引物具有良好的特异性，与猪的其他病原没有交叉反应；其敏感性与OIE参考的方法相当；所建立的PCR方法能够成功扩增非洲猪瘟病毒17个分离株的基因组，野外样...
猪瘟病毒3′非编码区的多态性及其二级结构分析
猪瘟病毒 3′-UTR 不均一性 二级结构分析
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2010/4/1
【目的】分析CSFV 3′-UTR一级序列和二级结构,为研究其对病毒复制、增殖和毒力的关系奠定良好的基础。【方法】利用RT-PCR技术扩增CSFV Thiverval株、HCLV株和Shimen株的3′-UTR并测序,使用DNAstar、Sequencher和RNAstructure软件进行CSFV 3′-UTR基因组序列的比对分析和二级结构模拟。【结果】Thiverval株3′-UTR最长可达2...
猪瘟病毒低温诱变疫苗Thiverval株感染性克隆的构建及病毒拯救
猪瘟病毒 疫苗Thiverval株 感染性克隆 病毒拯救
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2009/11/3
采用高保真DNA聚合酶，分7个片段扩增猪瘟病毒（CSFV）Thiverval株全基因组序列，克隆至pMD18T载体并测序。经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101，同时对病毒基因组5′和3′末端进行修饰，构建出含有T7启动子、榔头状（HH）核酶基因、CSFV Thiverval全基因组、丁型肝炎病毒（HDV）核酶基因和T7终止子的重组质粒pAC/F101/T17。利用T...
猪瘟病毒3′非编码区的多态性及其二级结构分析
猪瘟病毒 3′-UTR 不均一性 二级结构分析
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2010/3/16
【目的】分析CSFV 3′-UTR一级序列和二级结构,为研究其对病毒复制、增殖和毒力的关系奠定良好的基础。【方法】利用RT-PCR技术扩增CSFV Thiverval株、HCLV株和Shimen株的3′-UTR并测序,使用DNAstar、Sequencher和RNAstructure软件进行CSFV 3′-UTR基因组序列的比对分析和二级结构模拟。【结果】Thiverval株3′-UTR最长可达2...
猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位鉴定
猪瘟病毒 E2蛋白 抗原表位 噬菌体展示多肽库
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2010/1/29
本研究通过建立CSFV噬菌体展示多肽库，并对其进行生物淘选，以期获得E2蛋白上新的抗原表位。选择CSFV石门株（SM）和疫苗株（HCLV）为代表株，采用噬菌体展示技术，以T7select4151b为载体，分别构建了CSFV SM株和HCLV株E2基因噬菌体展示多肽库（SME2 库和HCLVE2 库）。通过生物淘选和噬菌体原位杂交技术，采用7株猪瘟单克隆抗体和1株猪瘟高免血清分别对构建的SM...
猪瘟病毒低温诱变疫苗Thiverval株感染性克隆的构建及病毒拯救
猪瘟病毒 疫苗Thiverval株 感染性克隆 病毒拯救
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2013/12/9
采用高保真DNA聚合酶，分7个片段扩增猪瘟病毒（CSFV）Thiverval株全基因组序列，克隆至pMD18T载体并测序。经适当的连接策略将各片段连接克隆至低拷贝载体质粒pAC/F101，同时对病毒基因组5′和3′末端进行修饰，构建出含有T7启动子、榔头状（HH）核酶基因、CSFV Thiverval全基因组、丁型肝炎病毒（HDV）核酶基因和T7终止子的重组质粒pAC/F101/T17。利用T...