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该成果研发了一种鸭新城疫、鸭瘟和鸭坦布苏病毒病的多重PCR检测引物，包括针对鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒和鸭坦布苏病毒的引物。建立了多重PCR体系，可准确检测水禽NDV、DPV、DTMUV的单一或混合感染，并对该多重PCR体系进行了优化，确定了最佳的引物比例、引物浓度和Premix rTaq酶，使得NDV、DPV、DTMUV3种病毒的DNA扩增效果更好，检测精度更高，在鉴别时具有重要优势。
《鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法》地方标准通过审定(图)
鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法 地方标准 审定
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2020/6/1
2020年5月13日，福建省农业科学院畜牧兽医研究所牵头制定的福建省地方标准《鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法》审定会在福州召开。会议由福建省市场监督管理局组织，邀请福建省畜牧兽医学会、福建省标准化研究院、福建省畜牧总站、福建师范大学、福州市动物疫病预防控制中心、福建农业职业技术学院和兆丰华生物科技（福州）有限公司7个单位的专家对该标准进行审定。
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针，经优化反应条件，建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法，验证方法的敏感性、特异性和稳定性，对50份临床样品进行检测，并与猪瘟国标方法及OIE...
本试验的目的是建立更加灵敏的检测牛冠状病毒（BCoV）的RT-PCR方法，并对川西北草原牦牛病料进行BCoV病原检测。选择BCoV聚合酶基因Nsp7-Nsp9片段设计引物，通过反应条件和体系优化，建立检测BCoV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。结果显示：所建方法特异性和重复性好，灵敏性达到1×10-2 pg·μL-1；该方法对肉牛和牦牛BCoV都有良好的检测效果，优于比较的两种以BCoV ...
轮状病毒(rotavirus，RV)VP6基因是RV的主要分子检测靶点，但该基因的点突变会影响RV的分子检测。本试验的目的是在研究牦牛RV VP6基因遗传变异的基础上，建立检测牦牛RV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。采用Prime 5.0设计引物，从30个牦牛腹泻样本中扩增得到14个位于931—1 338 bp牦牛RV VP6基因片段。序列分析结果发现，与牛轮状病毒（bovine rota...
鸡传染性贫血病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用
鸡传染性贫血病毒 实时荧光定量PCR 弱毒疫苗 污染
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2016/7/26
为了更快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒（CIAV）的污染，根据CIAV基因组保守序列设计合成了引物及TaqMan探针，通过优化反应条件建立了快速检测CIAV的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，建立的检测方法灵敏度可达10拷贝•μL－1，比常规PCR灵敏度高100倍。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克病病毒等病毒基因均无交叉反应，具有很好的特异性；批...
水貂阿留申病毒纳米PCR检测方法的建立与初步应用
水貂阿留申病病毒 纳米PCR 检测
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2016/12/7
为建立便捷、灵敏的水貂阿留申病病毒（AMDV）纳米PCR检测方法，根据AMDV NS1基因的保守序列设计一对特异性引物，对纳米PCR反应的退火温度、胶体金浓度进行了优化；测序检测扩增基因是否发生变异；对特异性和灵敏度进行了评估。结果表明，此纳米PCR的最佳退火温度为51 ℃，普通PCR为55 ℃；加入胶体金最佳浓度在0.2~0.8 nmol•L－1，纳米PCR与普通PCR产物测序相似性...
9种鸭病毒病GeXP多重PCR检测方法的建立及其应用
鸭病毒病 GeXP检测 多重PCR 特异性嵌合引物
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2016/12/26
旨在建立一种能够同时鉴别H5、H7和H9亚型禽流感病毒、基因A型鸭甲肝病毒、鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、新城疫病毒、鸭圆环病毒、番鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒9种常见鸭病毒病的GeXP多重PCR检测方法。根据这些病原体在GenBank上公布的保守基因序列，设计合成了12对特异性GeXP引物。用单一病毒或混合病毒样品的cDNA/DNA 模板优化反应条件，同时以其他常见鸭病病原体及鸭组织器官...
山羊淋巴结炎病原菌的分离鉴定及多重PCR检测方法的建立
伪结核棒状杆菌 化脓隐秘杆菌, 金黄色葡萄球菌
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2017/4/1
旨在对重庆地区山羊体表型淋巴结炎病原菌进行分离鉴定，并建立相应检测方法。无菌采集山羊患病部位脓液，进行病原菌分离鉴定，依据菌株16S RNA基因序列构建系统进化发育树，同时设计特异性引物，建立PCR检测方法。结果表明，从病料中主要分离到3种病原菌，分别为伪结核棒状杆菌、化脓隐秘杆菌和金黄色葡萄球菌；依据伪结核棒状杆菌磷脂酶D、化脓隐秘杆菌16S RNA和金黄色葡萄球菌nuc保守核苷酸序列设计引物，...
用RT-PCR检测海兰褐蛋鸡禽戊型肝炎病毒
禽戊型肝炎病毒（HEV） 海兰褐蛋鸡 大肝大脾病（BLS） 基因3型
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2016/9/21
为证实我国蛋鸡群中存在禽戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV），从患有大肝大脾病的某海兰褐蛋鸡群采集粪便样品40份、血浆样品10份。提取RNA后，进行禽HEV ORF2基因片段的RT-PCR（reverse transcription PCR）检测，阳性样品进行克隆测序。同时采集疑似HEV感染鸡的肝，在两周龄SPF鸡进行了人工接种试验。结果表明，来自海兰褐蛋鸡群的40份粪便和1...
近期作者实验室从腹泻牦牛粪便样本中鉴定出一种新型星状病毒（AstV）——牦牛AstV，本研究旨在建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。首先设计引物扩增牦牛AstV 630 bp的ORF2基因片段，进行序列分析；在此基础上设计检测引物，建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。结果显示，从20份牦牛腹泻粪便中扩增出13个牦牛AstV ORF2基因片段，核苷酸相似性为99.3%～100%，而与牛肠源星...
旨在建立一种同时检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪肠道病毒9型（PEV-9）、猪嵴病毒（PKV）的三重RT-PCR法，并初步应用于临床样品检测。根据GenBank中PEDV和 PKV基因序列保守区设计2对引物，参照文献合成1对PEV-9引物，在同一体系进行RT-PCR扩增，对引物浓度、退火温度、灵敏度、特异性等进行优化，应用该法对采自四川省6个猪场46份样品进行检测。结果表明引物量分别为PEDV...
参照GenBank中相关的基因序列，设计了6对引物分别用于扩增PRV gE、PPV NS1、PCV ORF2、PRRSV ORF7、CSFV E2、JEV E基因的部分片段。敏感性和特异性试验结果表明，该mPCR对6种病毒的最低核酸检测量分别为PRV 6.6 pg、PPV 96 pg、PCV 12.9 pg、PRRSV 10.5 pg、CSFV 51 pg、JEV 46 pg，对猪流感病毒（SIV...
猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立
荧光定量 猪源牛病毒性腹泻病毒 猪瘟病毒 猪繁殖 呼吸综合征
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2013/12/3
本研究旨在建立一种荧光定量PCR检测方法，用于猪源牛病毒性腹泻病毒（BVDVs）检测，同时能鉴别诊断猪瘟病毒（CSFV）。根据BVDVs与CSFV 5′-UTR保守序列，设计一套引物和特异TaqMan探针，以本实验室构建的猪源BVDVs 5′-UTR阳性重组质粒为标准品，通过优化反应条件，建立了标准曲线。以构建的标准品为模板进行了特异性、敏感性、重复性试验、并应用于临床检测。结果显示，该方法检测C...