搜索结果: 1-15 共查到“生物学 分泌表达”相关记录20条 . 查询时间(0.162 秒)
粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1在大肠杆菌中的分泌表达及其条件优化
磷脂酶A 粘质沙雷氏菌 分泌表达 优化
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2016/6/28
克隆粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因pla A,与载体p ET-22b(+)连接构建重组质粒p ET-22b(+)-pla A,并将重组质粒导入受体菌E.coli BL21(DE3)中表达,构建得到重组菌AP22,IPTG诱导表达目的蛋白后将培养基蛋白进行SDS-PAGE分析显示:重组蛋白以可溶性蛋白的形式大量存在于发酵液中,分子质量约35 ku,与预期蛋白大小一致。以磷脂酶A1酶活为指标,在...
微小毛霉凝乳酶的分泌表达、产物纯化及鉴定
凝乳酶 分泌表达 毕赤酵母
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2011/10/21
采用基因工程的方法对微小毛霉(Mucor pusillus)凝乳酶进行分子改造,获得适于乳品工业生产用的凝乳酶,克隆到了微小毛霉凝乳酶基因,构建了酵母表达质粒pPIC9K／M。线性化后电击转入毕赤酵母GS115, 在甲醇诱导下进行凝乳酶的初步发酵试验, 通过pH 反应及酶抑制反应试验证明,重组凝乳酶获得了分泌表达。SDS-PAGE 分析表明重组凝乳酶的分子量约为46 kD, 与理论值(45.3...
虎纹镇痛活性肽在毕赤酵母中的分泌表达
虎纹镇痛活性肽 毕赤酵母 分泌表达
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2008/8/5
虎纹镇痛活性肽HWAP-Ⅰ是从虎纹捕鸟蛛初毒中分离纯化，具有镇痛活性的多肽类神经毒素.为了在P.pastoris中高效分泌表达HWAP-Ⅰ，依照RT-PCR的结果，人工合成编码虎纹镇痛活性肽的基因片段，与酵母表达载体pPIC9K重组，构建表达质粒pPIC9K-HWAP-Ⅰ.转化GS115宿主菌后，筛选出整合型His+MutS表达菌株.经诱导培养后，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)证明HWAP...
青岛海葵强心活性多肽在毕氏酵母中的分泌表达
青岛海葵强心活性多肽 毕氏酵母 分泌表达
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2008/7/8
青岛海葵中存在两种具有增强心肌收缩功能的多肽类毒素（分别命名为Ap-QD1和Ap-QD2).通过分析已经得到Ap-QD2的氨基酸序列，按照毕氏酵母的偏爱密码子设计并合成了Ap-QD2的cDNA.将合成cDNA序列通过PCR扩增及一系列分子克隆操作导入毕氏酵母表达载体pPICZαA中，以电穿孔方法转化毕氏酵母GS115和KM71，并进行转化子的表型及高拷贝化筛选.其中的KM71(Muts)...
人egf基因在突变枯草芽孢杆菌WYBS2001中的转化、分泌表达及其产物功能研究
枯草杆菌 人表皮生长因子 分泌表达
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2008/1/29
摘要通过紫外线突变诱导获得了对感染致病菌具有显著抑菌作用的枯草芽孢杆菌突变株WYBS2001。采用PCR技术人工合成了175bp的人表皮生长因子（hEGF）的基因片段，并引入PstI、HindIII酶切位点、起始密码子及pUS186载体信号肽序列CTTAGA。经DNA测序分析，合成的片段与人egf基因序列完全一致。然后将其克隆至枯草杆菌分泌型质粒载体pUS186上构建成重组质粒pUSE，并转化枯草...
本文将志贺氏毒素B亚单位(StxB)与大肠杆菌溶血素A的C末端(HlyA(CT))相融合，蛋白S txB/HlyA(CT)不仅能在大肠杆菌中分泌到胞外，而且也能从aroA突变的减毒鼠伤寒沙门氏菌 中分泌出去。当用高拷贝质粒pUC18作载体时，上述融合蛋白对宿主细胞有毒性，但以低拷 贝质粒pBR322取代之后，该融合蛋白不再对宿主细胞产生任何不利影响。融合蛋白StxB/H1y A(CT)无论是在ae...
猪IFNα基因在毕赤酵母中的高效分泌表达High Level Secretion Expression of PoIFNαin Pichia pastoris
猪IFNα 巴斯德毕赤酵母 基因重组 分泌表达
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2008/1/10
摘要
巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA含有强启动子PAOX1和α-MF信号肽序列,构建猪IFNα基因的重组质粒pPICZαA-IFNα，并转入E.coli JM109中，得到转猪IFNα基因工程菌，经酶切鉴定克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为猪IFNα基因。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA-IFNα质粒转化到巴斯德毕赤酵母KM71中。SDS-PAGE和Western b...
Signal peptide capable of efficiently directing many protein secretion in mammalian cells is one of the key elements in recombinant protein production,gene therapy and the development of DNA vaccines....
摘要 将酵母交配因子 (MF)α1信号肽编码序列和人血管抑制素 (hAGN)cDNA融合序列插入穿梭载体pYADE4 ,构建得到分泌型重组表达质粒pYADEMA18.转化酿酒酵母JG110 7后 ,用 2 %乙醇和2 %甘油联合诱导表达 .ELISA分析表明 ,在诱导 14h～ 30h期间 ,hAGN获得了表达并分泌至细胞外 .发酵上清液经 75 %饱和度硫酸铵沉淀、CM 5 2纤维素离子交换层...
人骨保护素在毕赤酵母中的分泌表达及表达产物的生物活性分析(英文)
人骨保护素 巴斯德毕赤酵母 基因表达 破骨细胞
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2007/12/24
摘要 为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG) ,以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到人OPG编码区cDNA ,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ B ,电转化毕赤酵母GS115 (Mut+) ,经 3%甲醇诱导分泌表达人OPG与组氨酸的融合蛋白 .SDS PAGE及Western印迹分析表明 ,有分子量约 6 6kD的...
人肝细胞生长因子(hdHGF)基因在毕赤酵母中的分泌表达
肝细胞生长因子 巴斯德毕赤酵母 分泌表达
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2007/12/24
摘要 研究了hdHGF基因在毕赤酵母中的表达 .以人胎盘mRNA为模板 ,经逆转录、重叠PCR获得hdHGF全长和成熟基因片段 .将该基因片段克隆到pPIC9载体上 ,将重组表达质粒转化巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115,筛选mut+ 表型 ,经甲醇诱导可实现rhdHGF的分泌表达 .经摇瓶培养筛选出 4株表达水平较高的酵母工程菌株 ,SDS PAGE分析和Western印...
可溶性55kD人肿瘤坏死因子受体(shTNFR55)在变铅青链霉菌中的分泌表达
肿瘤坏死因子受体 链霉菌 表达
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2007/12/19
摘要 从 Ｈｅ Ｌａ 细胞中提取总 Ｒ Ｎ Ａ，采用反转录 Ｐ Ｃ Ｒ 技术，从该总 Ｒ Ｎ Ａ 中扩增了约 ５３０ ｂｐ 的ｓｈ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ５５ 基因的 ｃ Ｄ Ｎ Ａ，并克隆至质粒 ｐ Ｕ Ｃｍ ｅｌ中酪蛋白酶 ｍ ｅｌ Ｃｌ 分泌信号肽编码序列的下游，构建成含融合基因 ｍ ｅｌ／ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ 的重组质粒 ｐ Ｕ Ｃｍ ｅｌ／ Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ．把融合基因 ｍ ｅｌ／ Ｔ Ｎ...
摘要 我们研究了外源基因——合成的人胰岛素原基因在酵母α因子系统中的表达和分泌。用表达载体YTI-15转化酵母63号株可得到每升约2毫克的人胰岛素原分泌产物。
人血小板生成素全长分子在酵母系统中的分泌表达及活性分析
血小板生成素 毕赤酵母 分泌表达 活性测定
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2007/12/18
摘要 外源基因可通过整合型载体被整合到毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）染色体上，获得遗传性稳定分泌表达株．利用酵母信号肽ＭＦα，对该信号肽蛋白酶识别位点的相关序列进行重新设计，使天然人ＴＰＯ成熟肽在毕赤酵母系统中分泌表达成功．表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ进行分析，分子量约为６６ｋＤ处蛋白条带可被ＴＰＯ抗体识别；表达量约为０．１ｇ／Ｌ；Ｎ端氨基酸序列分析结果与设计的一致；表达产物对小鼠...