搜索结果: 1-15 共查到“兽医学 真核表达载体”相关记录25条 . 查询时间(0.194 秒)
旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体，而后将其导入成纤维细胞，分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响。选择40日龄敖汉细毛羊胎羊，采集组织样品，提取RNA后反转录成cDNA，通过PCR反应后利用SoSo试剂盒将纯化的目的片段与表达载体pcDNA3.1连接。酶切鉴定正确后，转至大肠杆菌DH5α感受态细胞，振荡培养并挑取单菌落扩大培养。提取质粒后将p...
为了研究绵羊Musclin对糖代谢和胰岛素作用的影响，本试验运用生物信息学软件对其结构特征进行预测，并构建绵羊Musclin基因真核表达载体。分4组对绵羊胎儿成肌细胞进行处理：空载体组（pcDNA3.1）、Musclin过表达组（pcDNA3.1-Musclin）、空载体+胰岛素组（pcDNA3.1+Insulin）、Musclin过表达+胰岛素组（pcDNA3.1-Musclin+Insulin...
旨在利用同源重组构建敖汉细毛羊Hoxa5、BMP6基因表达载体及共转染成纤维细胞后通过基因表达量变化研究两基因之间的相互作用关系。以敖汉细毛羊为研究对象，采集30日龄的胎羊。首先，通过RNA的提取反转录成cDNA参照GenBank中Hoxa5、BMP6基因序列和pcDNA3.1序列分别设计1对含有同源臂的引物，通过PCR反应扩增获得Hoxa5、BMP6基因片段、利用SoSo试剂盒将目的片段连接到p...
本研究旨在克隆从江香猪FoxO 4基因编码区序列，对FoxO 4基因功能进行初步探究。采用qRT-PCR技术对从江香猪（6月龄）不同组织中FoxO 4基因的相对表达量进行检测；PCR扩增FoxO 4基因CDS区，构建真核表达载体pEGFP-N3-FoxO4；利用脂质体法将重组质粒pEGFP-N3-FoxO4瞬时转染从江香猪皮下脂肪前体细胞，通过qRT-PCR方法，检测FoxO 4、PPARγ、LP...
小分子RNA (miRNA)是近年来发现的一类内源性、非编码单链小RNA，其在乳腺组织免疫防御过程中发挥的调控作用逐渐引起了人们的关注。作者拟用qRT-PCR检测炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应中的表达变化；构建3种miR-223真核表达载体并检验重组载体的转染效率。用不同浓度 LPS处理小鼠乳腺上皮细胞（EpH4-Ev）48 h，qRT-PCR检测miR-223、miR...
猪MC4R基因突变体真核表达载体的构建及功能研究
猪 黑素皮质素受体-4 突变体 表达
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2016/4/29
为研究MC4R基因不同突变体的功能差异，本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列，将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行Kpn Ⅰ 和EcoR Ⅰ双酶切，连接形成重组表达载体MC4R1，将载体转染BHK细胞后Western blotting 检测蛋白表达。通过点突变法得到MC4R基因在707/892位点的3个突变载体，将突变载体瞬时转染到BHK细胞，采用免疫荧光对细胞进行标记，通过...
为了进一步探究猪LTβR基因的生物学功能，本研究以猪淋巴组织cDNA为模板扩增LTβR基因CDS区，进一步利用生物信息学对猪LTβR蛋白结构与功能以及参与的GO和Pathway通路进行分析，利用Real-time PCR检测LTβR基因在大白猪不同组织中的表达水平，同时将LTβR基因扩增产物克隆至真核表达载体pEGFP-C1中，并分别转染猪HEK293和IPEC-J2小肠上皮细胞系，通过显微镜观察...
猪RIG-I真核表达载体的构建及其抗口蹄疫病毒作用研究
口蹄疫病毒 RIG-I 天然免疫 抗病毒作用
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2015/5/28
为研究模式识别受体分子RIG-I是否具有抑制口蹄疫病毒(FMDV)复制的作用，本研究从猪的PK15细胞中提取RNA，通过分段扩增与融合PCR的方法，扩增猪的RIG-I的完整CDS序列，进一步构建猪RIG-I的真核表达质粒。通过Western blotting和间接免疫荧光试验对构建的真核表达质粒进行表达验证，证明其成功表达，同时证明猪RIG-I蛋白定位于细胞的细胞质中。感染试验发现FMDV能够诱导...
中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因真核表达载体的构建及其表达研究
磷脂酶C zeta pEGFP-N1 真核表达
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2014/5/27
旨在构建PLCζ真核表达载体，初步研究其在体细胞系中的表达特性。本研究用PCR技术扩增出PLCζ基因片段，克隆至载体pEGFP-N1，鉴定无误后，将构建了重组质粒pEGFP-N1-PLCζ转染293T细胞和绵羊成纤维细胞，在倒置荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察重组质粒在细胞中的表达和分布。经酶切与测序证明，本试验成功的构建了pEGFP-N1-PLCζ真核表达载体，并且成功与绿色荧光蛋白融合表...
绵羊YAP1基因的克隆及其真核表达载体和突变型载体的构建
绵羊 YAP1基因 真核表达载体 磷酸化位点突变体
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2013/11/28
本研究旨在克隆绵羊YAP1基因CDS序列，构建并鉴定其真核表达质粒pEGFP-C1-YAP1,及其磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1 S42A。本研究利用RT-PCR技术，从湖羊背最长肌克隆YAP1基因编码区序列，T-A克隆到pMD 19-T载体中，进行测序。利用酶切和T4连接酶连接方法，将YAP1基因编码区克隆到pEGFP-C 1载体中，构建pEGFP-C 1-YAP1真核表达载体，以真...
试验克隆了崂山奶山羊Myostatin基因序列,构建了其真核表达载体,并验证了其在成纤维细胞中的表达。本研究通过从崂山奶山羊肌肉组织中提取RNA,反转录后采用巢式PCR方法扩增出Myostatin基因序列,构建真核表达载体,通过转染成纤维细胞,采用RT-PCR方法验证其表达。结果表明,克隆出崂山奶山羊Myostatin基因的全长cDNA序列,大小为1128 bp,GenBank登录号:GU3773...
本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP3、GP5和M蛋白的真核重组质粒。以PRRSV LN株为模板，采用PCR方法扩增出GP3、GP5、M基因片段，将扩增的GP5、M通过Linker序列串联成GP5M，然后将GP3与GP5M双酶切后插入pcDNA3.1（+）构建重组质粒pcDNA3.1GP3GP5M，将其转染COS7细胞。PCR鉴定表明重组质粒pcDNA3.1GP3...
黄牛MEF2A基因克隆及真核表达载体构建
MEF2A基因 克隆 真核表达载体
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2013/11/29
旨在克隆MEF2A基因和构建其真核表达载体，为黄牛种质资源保存利用以及肉牛转基因育种和产业化提供基因资源和育种素材。本研究通过RT-PCR克隆黄牛MEF2A基因CDS区，并将其插入到质粒载体pEGFP-C1的多克隆位点中，构建真核表达载体pEGFP-C1-MEF2A。同时应用生物学软件分析MEF2A基因及其编码蛋白的生物学特性，了解其复杂的调控机能。结果，MEF2A基因的CDS区全长1 494 b...
猪FcγRⅠ真核表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立
猪FcγRⅠ受体 共转染 Marc-145细胞
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2013/12/6
本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA, 应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA，并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒；用脂质体共转染Marc-145细胞，经潮霉素B(300 μg·mL-1)和G418(400 μg·mL-1)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系；运用RT-PCR、玫瑰花环和流...
鸡IL-6真核表达载体的构建及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用研究
鸡 IL-6真核表达载体 新城疫 LaSota疫苗
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2009/6/11
利用RT-PCR方法从ConA诱导的鸡脾淋巴细胞RNA中扩增出IL-6基因，与pCI-neo连接构建真核表达质粒pCI-IL-6，并研究pCI-IL-6在CEF细胞中的表达及其对新城疫LaSota疫苗的免疫增强作用。研究发现，pCI-IL-6在CEF细胞中得到表达，pCI-IL-6和LaSota疫苗联合免疫组HI抗体、CD4+、CD8+和CD3+T淋巴细胞百分含量从免疫后第14天起均高于LaSot...