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本研究旨在探讨不同浓度的组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对转基因水牛成纤维细胞外源基因表达水平的影响，为外源基因表达机制研究及提高转基因水牛生产效率提供理论依据。试验首先使用不同浓度的UNC0638（0（对照组）、0.5、1.5、2.5、5.0 μmol·L-1）处理水牛胎儿成纤维细胞（BFFs）8 d，绘制细胞生长曲线，并在UNC0638（0（对照组）、0.5、1.5、2.5 μmol·L-1）...
【目的】水稻谷蛋白启动子GluB1(GluB1 promoter，pGluB1)常用于外源基因在种子中特异性高效表达的研究，也是研究种子储藏蛋白基因表达调控机制的模型。前人研究表明，pGluB1只在水稻胚乳中表达，而在根、茎、叶片、叶鞘、颖壳等组织中均无表达活性。研究的目的是为了克服种子特异表达启动子筛选周期长的缺点。【方法】将由pGluB1驱动的霍乱毒素B亚单位和重组胰岛素原组成的融合基因(a ...
青岛农业大学农学与植物保护学院植物分子育种概论课件第十一章 外源基因整合及表达的检测。
以吉林小粒7号大豆品种为材料，切取无菌幼苗下胚轴诱导愈伤组织，初步建立了大豆悬浮细胞系，测定不同硼酸浓度下悬浮细胞生长变化；采用农杆菌介导法对大豆悬浮细胞进行外源GUS基因的转化，先通过不同程度的超声处理确定最佳超声时长，然后在最佳超声处理时长的基础上，探讨了硼酸浓度对转化效率的影响；最后采用PCR和Southern blot杂交对抗性愈伤做分子鉴定。结果表明：大豆悬浮细胞正常生长硼酸浓度在2.0...
猪日本乙型脑炎病毒DNA复制子载体的构建及外源基因表达分析
复制子 表达载体 HA GP5
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2015/3/5
猪日本乙型脑炎病毒(JEV)是引起以母猪流产为主要特征的繁殖障碍性疾病病原之一,笔者拟构建JEV的DNA型复制子载体,并利用该载体表达外源基因。以JEV毒株SA14-14-2为基础，去除病毒结构蛋白基因prM和部分E基因而保留全部非结构蛋白和非编码区序列，插入FMDV2A和丁肝病毒核酶序列构建复制子表达载体pAC-JEV，实时定量 PCR、间接免疫荧光、Western blotting方法检测JE...
转基因克隆牛外源基因整合位点的检测
转基因克隆牛 TAIL-PCR 整合位点
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2014/5/27
确定外源基因的整合位点是获得转基因动物后的首要任务。本试验应用 TAIL-PCR得到了2头转入人溶菌酶基因克隆牛外源基因的整合位点，结果表明：2头转基因个体中外源基因均整合在受体基因组上,其中WS个体外源基因整合在牛24号染色体的基因组克隆(NW_003104566.1)中。YW个体中外源基因整合在牛16号染色体的基因组克隆(NW_003104440.1)中，整合位点位于LOC10030和RGL1...
转基因大豆外源基因NOS终止子定量测定的不确定度分析
转基因大豆 NOS终止子含量 不确定度 评估
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2015/11/10
为了解转基因成分定量分析结果不确定度的主要贡献因素，提高转基因成分定量检测质量，用含转基因大豆GTS40-3-2样品进行了NOS终止子含量的测定，并对其测量不确定度进行了初步估算。NOS终止子测量不确定度估算结果：A类不确定度（uA）为0.002，B类不确定度（uB）为0.002，合成不确定度（uC）为0.003；在置信水准（P）为95%的条件下，包含因子（k）取1.96，测量结果的扩展不确定度（...
【目的】医学方面的大量研究证实,聚乙烯亚胺（polyethylenimine,PEI）作为一种新型阳离子多聚物基因载体可以吸附和浓缩DNA,通过与细胞膜亲和粘附和细胞吞噬作用运载外源基因进入细胞并实现表达。本实验研究旨在探索PEI作为非病毒基因载体介导外源基因进入植物细胞并获得瞬时表达的可能性。【方法】制备PEI/DNA复合物,利用凝胶阻滞分析PEI与DNA的结合情况,采用电子显微镜观察PEI/D...
外源基因转染真核细胞技术的研究进展
外源基因 转染 真核细胞
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2009/6/18
基因转染技术是将外源基因转染真核细胞的一种技术。对外源基因转染真核细胞的目的、意义、转染技术分类、方法及其应用等
作一综述。
球毛壳菌作为一种有效的生防真菌，能对多种植物病原真菌产生拮抗作用。有文献报道，毛壳菌可预防谷物秧苗的枯萎病、甘蔗猝倒病，降低由镰刀菌引起的番茄枯萎病、黑星菌引起的苹果斑点病等的发病率，且对立枯病丝核菌、甘蓝格链孢、拟茎点霉属、毛盘孢属、葡萄孢属等病原菌的生长有一定的抑制作用，对山杨根腐病(Fusarium acuminatum)、小麦斑枯病(Cochliobolus...
慢病毒载体介导外源基因在不同细胞及鸡体不同组织中的表达
慢病毒载体 鸡原生殖细胞(cPGC) 转基因鸡 绿色荧光蛋白
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2009/1/16
慢病毒载体介导外源基因在不同细胞及鸡体不同组织中的表达。
基因枪在谷子外源基因转化中的技术研究
谷子基因 枪外源 基因转化
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2008/12/9
建立了以谷子松软愈伤组织为受体，钨粉浓度60-80mg/ml，质粒DNA每次加4-6微克，基因枪样品室高度6cm，轰击速度350-400米/秒，弹头前端点样，滤纸固定愈伤组织，轰击一次的谷子基因枪外源基因转化操作参数，国际先进。
重组外源基因的猪细小病毒VP2蛋白病毒样颗粒的构建与鉴定
猪细小病毒 猪圆环病毒2型 嵌合 病毒样颗粒
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2008/12/1
将猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白第165-200位氨基酸多肽基因嵌合在猪细小病毒（PPV）VP2 N 端，然后重组到腺病毒pAdEasy-1表达系统中，转染HEK-293A细胞，获得重组腺病毒（rAd-PPV∶VP2-PCV2∶Cap）。IFA和Western blotting分析分别可见特异性荧光和大小约为64 ku的特异性带，表明rAd-PPV∶VP2-PCV2∶Cap在HEK-293细...
携带外源基因的重组减毒李斯特菌构建及其免疫原性
李斯特菌 免疫原性 携带外源基因
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2008/9/17
单增李斯特菌作为疫苗载体可以将外源基因或其表达产物呈递给宿主抗原递呈细胞，并诱导相应的免疫反应。该项目以鸡新城疫病毒（NDV)融合蛋白F基因和绿色荧光蛋白基因gfp为模式抗原基因，将其插入李斯特菌毒力基因actA、plcB和hly的信号肽序列之后，成功构建了重组李斯特菌多株。与野生型亲本菌株相比，重组菌对小鼠和鸡胚的毒力（LD50)下降幅度在1～6.5对数之间，其中hly插入突变株对小鼠和鸡胚的毒...