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旨在深入研究小鼠髓源树突状细胞（BMDC）感染牛分枝杆菌（M.bovis）后环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合酶（cGAS）的调控作用。通过体外诱导C57BL/6骨髓细胞分化为树突状细胞，建立牛分枝杆菌感染模型，运用siRNA技术沉默cGAS基因的表达，分别设置对照组、感染组、沉默组。通过流式细胞仪检测BMDC表型变化，Western blot和免疫荧光技术检测cGAS信号通路中STING、TBK1、p-TB...
牛分枝杆菌ag85b基因的瞬时表达
牛分枝杆菌 ag85b基因 克隆 表达
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2009/6/18
[ 目的] 为牛结核病DNA 疫苗的研制提供参考。[ 方法] 利用PCR 技术扩增出牛分枝杆菌ag85b 基因片段, 克隆到真核载体pcDNA3
.1( + ) 上, 构建重组质粒pcAg85B, 将重组质粒转染SP2/ 0 细胞, 间接免疫荧光试验检测该基因的表达情况。[ 结果] 结果表明: 在转
染了重组质粒pcAg85B 的SP2/ 0 细胞中出现绿色荧光, 说明ag85 b 基因在S...
牛分枝杆菌三价组合及融合DNA疫苗免疫效果的研究
牛分枝杆菌 融合DNA疫苗 多价DNA疫苗
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2008/8/21
分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原，在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体，构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗：3基因融合（pcDNA－MPB64－Ag85B－ESAT-6，pCMAE）DNA疫苗和三价（pcDNA－Ag85B+pcDNA－MPB64+pcDNA－ESAT-6）DNA疫...
牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E的原核表达、纯化及其圆二色谱分析
牛分枝杆菌 哺乳动物细胞侵入蛋白 原核表达 圆二色谱（CD）
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2008/4/22
为了阐明牛分枝杆菌侵入宿主细胞和在肺泡巨噬细胞长期存活的机理，本研究以牛分枝杆菌的DNA为模板，通过PCR的方法扩增克隆牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E（Mammalian cell-entry protein 4E，mce4 E）基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pET30a(+)并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的牛分枝杆菌和人分枝杆菌mce4 E基因同源性为100%。将重...
检测牛分枝杆菌的噬菌体生物扩增法的建立及初步应用
分枝杆菌噬菌体 牛分枝杆菌 检测方法 牛乳
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2008/4/10
建立噬菌体生物扩增法（PhaB）检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌（NTM）及5种非分枝杆菌，同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测，其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比较。结果表明，噬菌体工作浓度为1×109 PFU/mL、37℃感染2 h为最佳检测条件;杀毒剂浓度为100 mmol/L，室温作用10 min即可完全杀灭受试噬菌体；...
牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83和ESAT-6的融合表达及重组蛋白的初步应用
牛分枝杆菌 融合表达 ELISA
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2008/4/7
应用PCR方法从牛分枝杆菌Vallee株基因组中扩增获得mpb70、mpb83和esat-6三个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension，SOE)获得融合基因mpb70-mpb83后，将mpb70-mpb83和esat-6串连于同一表达载体pET32a(+)中得到重组质粒pET70-83-E6。转化BL21（DE3）大肠杆菌感受态后，经IPTG...
检测牛分枝杆菌的噬菌体生物扩增法的建立及初步应用
分枝杆菌噬菌体 牛分枝杆菌 检测方法 牛乳
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2013/12/23
建立噬菌体生物扩增法（PhaB）检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌（NTM）及5种非分枝杆菌，同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测，其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比较。结果表明，噬菌体工作浓度为1×109 PFU/mL、37℃感染2 h为最佳检测条件;杀毒剂浓度为100 mmol/L，室温作用10 min即可完全杀灭受试噬菌体；...
牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E的原核表达、纯化及其圆二色谱分析
牛分枝杆菌 哺乳动物细胞侵入蛋白 原核表达 圆二色谱（CD）
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2013/12/30
为了阐明牛分枝杆菌侵入宿主细胞和在肺泡巨噬细胞长期存活的机理，本研究以牛分枝杆菌的DNA为模板，通过PCR的方法扩增克隆牛分枝杆菌哺乳动物细胞侵袭蛋白4E（Mammalian cell-entry protein 4E，mce4 E）基因,将所扩增基因克隆于原核表达载体pET30a(+)并进行测序,结果显示该基因与GenBank上所公布的牛分枝杆菌和人分枝杆菌mce4 E基因同源性为100%。将重...
结核分枝杆菌与牛分枝杆菌全基因组比较分析
结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 全基因组比较
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2013/12/5
本研究旨在揭示结核分枝杆菌与牛分枝杆菌全基因组的遗传差异，为结核分枝杆菌与牛分枝杆菌的鉴别诊断提供新的分子标志。利用结核分枝杆菌H37Rv和牛分枝杆菌AF2122/97的全基因组测序结果，通过在线比对，完成了两者的全基因组比对分析。结果显示AF2122/97相对H37Rv存在14处大片段缺失，大小范围为0.8～12.7 kb，其中RD18、RD19及RD20等3处缺失为首次报道。此外，AF2122...
为研究IFN-γ对感染牛分枝杆菌的THP-1细胞的促凋亡作用，及TNF-α在此细胞凋亡过程中的作用和相关信号分子的变化，使用浓度为15 ng·mL-1的IFN-γ作用于不同剂量牛分枝杆菌北京株（MOI10∶1，20∶1）感染的THP-1细胞，在感染后12、24、36、48和72 h，使用流式细胞仪测定细胞凋亡百分比。结果显示，IFN-γ诱导了M. bovis北京株感染的细胞凋亡，并且凋亡呈时间相关...