搜索结果: 1-15 共查到“兽医学 定量PCR”相关记录26条 . 查询时间(0.1 秒)
旨在分析禽腺病毒血清4型（FAdV-4）感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平，本研究设计鸡NLRP3特异性引物，利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体，制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化，成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法，并利用该方法对致病性F...
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针，经优化反应条件，建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法，验证方法的敏感性、特异性和稳定性，对50份临床样品进行检测，并与猪瘟国标方法及OIE...
鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立
鸭肠炎病毒 疫苗株 UL2基因 EvaGreen 实时荧光定量PCR方法
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2019/1/15
鸭肠炎病毒（duck enteritis virus，DEV）疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染，该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大，复制非必需区多，可容纳多个外源基因的插入，被广泛用来作为基因工程载体来开发疫苗。当前，尚未见仅针对DEV疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法相关研究报道。本研究通过分析DEV疫苗株和强毒株UL2基因特点，明确...
猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立
猪肺炎支原体 猪鼻支原体 双重荧光定量PCR
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2017/8/22
建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物，分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针，建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系，同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10 copies·μL-1；与猪源致病菌、病毒和其他常见...
鸡传染性贫血病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用
鸡传染性贫血病毒 实时荧光定量PCR 弱毒疫苗 污染
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2016/7/26
为了更快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒（CIAV）的污染，根据CIAV基因组保守序列设计合成了引物及TaqMan探针，通过优化反应条件建立了快速检测CIAV的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，建立的检测方法灵敏度可达10拷贝•μL－1，比常规PCR灵敏度高100倍。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克病病毒等病毒基因均无交叉反应，具有很好的特异性；批...
貂肠炎病毒SYBR Green I 荧光定量PCR检测方法的建立
水貂肠炎病毒 SYBR Green I 荧光定量PCR
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2016/7/18
根据GenBank 登录的水貂肠炎病毒（ＭＥＶ）ＶＰ２ 蛋白基因的保守序列设计了１ 对特异性引物，经ＰＣＲ 扩增出１４６ ｂｐ 的目的片段，并克隆到ｐＭＤ １８ － Ｔ 载体上，提取重组质粒经ＰＣＲ 及测序鉴定正确后，以１０ 倍梯度稀释质粒作为阳性标准品，绘制荧光定量标准曲线，以此建立一种基于ＳＹＢＲ Green 荧光染料的定量ＰＣＲ 特异性检测水貂肠炎病毒的方法。结果表明：该方法对ＭＥＶ 有很好...
胞内劳森菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
猪胞内劳森菌 TaqMan荧光定量PCR 检测
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2014/12/25
为建立猪胞内劳森菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法，针对胞内劳森菌的16S rDNA基因设计合成特异性的引物和TaqMan探针，经过优化各项反应条件，建立了TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法仅对胞内劳森菌靶基因有信号，其相关性方程为Ct=－3.318×log(conc)+ 38.840（R2=0.998），具有良好的线性关系，对标准质粒最低检出量为5.55 copies•μ...
NF-κB信号通路在病毒感染、免疫损伤性疾病、肿瘤疾病中发挥重要作用，其活化水平常作为机体免疫应答水平、疾病发展进程的检测指标。为获得猪NF-κB p65/p50基因序列特征并建立体外定量检测其表达水平的实时荧光定量PCR方法，作者对猪NF-κB p65 ORF和成熟p50编码区进行RT-PCR扩增、克隆、测序及生物信息学分析；设计特异性荧光定量引物，建立检测p65、p50实时荧光定量PCR方法。...
禽白血病J亚群病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
禽白血病病毒J亚群 荧光定量PCR 病毒分布
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2013/12/2
本研究旨在通过荧光定量PCR方法研究禽白血病J亚群病毒（ALVJ）在家禽体内各个器官的分布。根据ALVJ NX0101毒株基因5 258—5 510 bp的碱基序列，设计了1对特异性引物，进行RTPCR反应，扩增产物为253 bp，将该产物连接T载体作为Realtime PCR反应的标准品，利用SYBR Green I染料进行Realtime PCR反应，建立了标准曲线，并进行反应灵敏性...
根据GenBank公布的鸡产蛋下降综合征病毒六邻体蛋白基因的高度保守序列，设计了2对特异性引物和1条TaqMan探针。以构建的阳性重组质粒为标准品，绘制标准曲线，建立了一种快速检测鸡产蛋下降综合征病毒的TaqMan荧光实时定量PCR方法。该方法最小检出量达10 copies·μL－1，在1.0×102～1.0×108copies·μL－1检测范围间有良好的线性关系，特异性、稳定性和重复性也较好。用...
TaqMan荧光定量PCR检测鸡产蛋下降综合征病毒方法的建立及应用
鸡产蛋下降综合征病毒 TaqMan探针 荧光实时定量PCR 临床检测
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2013/12/2
根据GenBank公布的鸡产蛋下降综合征病毒六邻体蛋白基因的高度保守序列，设计了2对特异性引物和1条TaqMan探针。以构建的阳性重组质粒为标准品，绘制标准曲线，建立了一种快速检测鸡产蛋下降综合征病毒的TaqMan荧光实时定量PCR方法。该方法最小检出量达10 copies·μL－1，在1.0×102～1.0×108copies·μL－1检测范围间有良好的线性关系，特异性、稳定性和重复性也较好。用...
猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立
荧光定量 猪源牛病毒性腹泻病毒 猪瘟病毒 猪繁殖 呼吸综合征
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2013/12/3
本研究旨在建立一种荧光定量PCR检测方法，用于猪源牛病毒性腹泻病毒（BVDVs）检测，同时能鉴别诊断猪瘟病毒（CSFV）。根据BVDVs与CSFV 5′-UTR保守序列，设计一套引物和特异TaqMan探针，以本实验室构建的猪源BVDVs 5′-UTR阳性重组质粒为标准品，通过优化反应条件，建立了标准曲线。以构建的标准品为模板进行了特异性、敏感性、重复性试验、并应用于临床检测。结果显示，该方法检测C...
血管内皮生长因子（VEGF）实时荧光定量PCR质粒标准品的构建
实时荧光定量 VEGF基因 质粒标准品
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2012/2/15
应用SYBR Green荧光染料检测方法构建VEGF基因质粒标准品，能快速、灵敏、可靠的检测与临床多种疾病密切相关的重要候选基因血管内皮生长因子（VEGF）的表达情况。本研究利用版纳微型猪近交系4~6月龄猪，提取皮肤创面总RNA，设计特异引物，进行RT PCR扩增。纯化目的片段并与pMD18T载体连接，转化宿主菌DH5α，提取重组质粒DNA，并经酶切、PCR和测序鉴定，计算重组质粒原液拷贝数浓度并...
猪星状病毒SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用
SYBR Green Ⅰ 猪星状病毒 检测
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2013/12/6
本研究旨在建立一种能够快速、简便、灵敏地检测猪星状病毒的基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法。根据已报道的猪星状病毒ORF2基因序列，设计并合成1对引物，通过PCR扩增ORF2基因片段，将测序正确的ORF2基因片段克隆入pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α，经测序鉴定后得到阳性重组质粒，作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线，并对其灵敏性、特异...
布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用
布氏杆菌 结核杆菌 二重实时荧光定量PCR
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2013/12/6
本试验旨在利用二重实时荧光定量PCR技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合，建立二重实时定量PCR鉴别诊断方法，对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验，并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳，该二重实时荧光定量PCR方法中布...