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中国科学院南京土壤研究所专利：一种基于实时荧光定量PCR检测土壤小麦赤霉病菌含量的方法。
鳗鲡疱疹病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
鳗鲡疱疹病毒 荧光定量PCR SYBR GreenⅠ 检测方法
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2021/4/16
为了建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus, AngHV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法，利用PCR扩增出AngHV ORF49的序列，克隆至pET-32a载体，构建重组质粒pET-32a-ORF49，作为qPCR的标准品；根据ORF49序列设计引物，以梯度稀释的质粒标准品为模板，进行SYBR Green Ⅰ qPCR扩增，制作标准曲线，建立...
喜树丛枝植原体的分子鉴定及TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立
喜树丛枝病 植原体 TaqMan探针 实时荧光定量PCR
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2021/6/22
为确定在云南文山地区喜树上发生的疑似丛枝病的病原种类及快速检测喜树丛枝病,本研究利用植原体16S rDNA基因通用引物P1/P7和R16F2n/R16R2对感病喜树总DNA进行常规PCR和巢式PCR扩增、克隆和测序,通过系统进化分析,明确了喜树丛枝植原体属于16SrXXXII组。然后根据喜树丛枝病植原体16S rDNA基因保守区域设计并合成特异性引物和TaqMan探针,制备了喜树丛枝病植原体标准质...
本试验旨在通过快速定量不同发酵时期下发酵豆粕中解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）的数量，以解决豆粕发酵过程品质监控的瓶颈难题，建立解淀粉芽孢杆菌的实时荧光定量PCR方法。根据解淀粉芽孢杆菌DNA解旋酶A亚基（gyrA）基因及16S核糖体RNA（16S rRNA）基因的保守区设计出3对引物，利用常规PCR筛选出1对特异性引物，并以该引物的扩增产物构建的重组质粒作为...
旨在分析禽腺病毒血清4型（FAdV-4）感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平，本研究设计鸡NLRP3特异性引物，利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体，制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化，成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法，并利用该方法对致病性F...
茉莉花实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证
茉莉花 qRT-PCR 内参基因 表达稳定性
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2021/4/1
为筛选适合茉莉花的内参基因，以5种组织（根、茎、嫩叶、成熟叶、花）和4个发育阶段的花（幼蕾期、膨大花蕾期、最长花蕾期和初绽期）为试验材料，选择较常见的8个候选内参基因进行引物特异性分析，结果显示，8个内参基因均扩增出单一条带，溶解曲线均只有明显的单一峰。采用qRT-PCR技术分析8个内参基因在不同样品中的表达量，结果显示，内参基因在不同样品中的表达量存在差异，各基因在花中的表达量均显著低于其他样品...
日前，中国水产科学研究院黑龙江水产研究所李绍戊等人完成的“杀鲑气单胞菌的SYBR Green I实时定量PCR检测方法及其应用”获得国家发明专利授权,专利授权号：ZL201611031012.6。
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针，经优化反应条件，建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法，验证方法的敏感性、特异性和稳定性，对50份临床样品进行检测，并与猪瘟国标方法及OIE...
莲藕中甘薯潜隐病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立及应用
莲藕 甘薯潜隐病毒 实时荧光定量PCR
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2020/9/14
甘薯潜隐病毒莲藕分离物（sweet potato latent virus-lotus，SPLV-lotus）在江苏省莲藕产区普遍引起发病，并且该分离物序列与已报道的SPLV甘薯分离物存在较大差异。为进一步监测SPLV-lotus在莲藕上的发生情况，针对SPLV-lotus的CP基因设计并优化特异性引物QSPLV-lotus3-F/QSPLV-lotus3-R，通过优化引物浓度和退火温度条件，构建...
番茄褪绿病毒TaqMan荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用
番茄褪绿病毒 烟粉虱 外壳蛋白 携毒率 扩增效率 TaqMan RT-qPCR
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2020/4/28
【目的】本研究旨在建立TaqMan实时荧光定量PCR(TaqMan RT-qPCR)技术，快速检测单头烟粉虱Bemisia tabaci体内的番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus, ToCV)。【方法】根据 ToCV外壳蛋白保守序列设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针，建立了TaqMan RT-qPCR方法；与常规PCR检测进行比较，检测该方法的灵敏度与特异性；并应用该...
龟裂链霉菌M527荧光定量PCR内参基因的选择及其稳定性评估
龟裂链霉菌M527 荧光定量PCR 内参基因 稳定性
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2020/7/6
龟裂链霉菌Streptomyces rimosus M527是龟裂霉素（rimocidin）的生产菌，其对多种植物病原真菌具有较强的拮抗作用。为从转录水平分析菌株M527以及其抗性突变株中龟裂霉素的合成调控机制，荧光定量PCR内参基因的选择与稳定性评估显得尤为重要。本研究选用16S rRNAsr、hrdBsr、rpoAsr、sigFsr、sigBsr、gyrBsr这6个基因作为候选内参基因，使用g...
筛选出适合牧草盲蝽Lygus pratensis在不同条件下稳定表达的内参基因。【方法】选取编码牧草盲蝽α-微管蛋白、β-微管蛋白、肌动蛋白、延伸因子、琥珀酸脱氢酶复合体A、泛素、转录起始因子TFIID亚基、谷胱甘肽S-转移酶、核糖体蛋白L32及TATA盒结合蛋白的10条基因为候选内参基因，采用qRT-PCR技术测定其在牧草盲蝽不同性别成虫、成虫不同组织、不同龄期、对功夫菊酯不同抗性成虫、不同温度...
DNA条形码与实时荧光定量PCR技术在铁皮石斛鉴定中的应用
铁皮石斛 多重荧光PCR 探针 鉴定
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2020/6/17
为建立铁皮石斛准确、高效的鉴定体系,本研究以101份石斛属和蝴蝶兰属植物样品为试验材料,通过对比ITS、psbA-trnH、matK及rbcL基因在石斛属植物中的鉴定能力,筛选出ITS作为本研究最理想的DNA条形码。以ITS序列作为靶基因,设计铁皮石斛特异引物和特异探针,以及石斛属通用引物和探针,利用实时荧光定量PCR(TaqMan)技术,建立铁皮石斛多重实时荧光PCR检测新体系,通过特异性、灵敏...
番茄细菌性斑点病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
番茄 丁香假单胞菌番茄致病变种 实时荧光定量PCR 种子检测 组织检测
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2019/3/5
以番茄细菌性斑点病病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种（Pseudomonas syringae pv. tomato，Pst）的致病相关基因HrpZ为靶序列，设计了特异性引物Pst3F/Pst3R，能从Pst基因组DNA中特异性扩增出大小为161 bp的目的片段。建立的Pst实时荧光定量PCR检测技术体系的检测灵敏度比普通PCR高1 000倍。利用实时荧光定量PCR检测体系，检测模拟带菌种子中Pst的...