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《鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法》地方标准通过审定(图)
鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法 地方标准 审定
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2020/6/1
2020年5月13日，福建省农业科学院畜牧兽医研究所牵头制定的福建省地方标准《鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法》审定会在福州召开。会议由福建省市场监督管理局组织，邀请福建省畜牧兽医学会、福建省标准化研究院、福建省畜牧总站、福建师范大学、福州市动物疫病预防控制中心、福建农业职业技术学院和兆丰华生物科技（福州）有限公司7个单位的专家对该标准进行审定。
本试验的目的是建立更加灵敏的检测牛冠状病毒（BCoV）的RT-PCR方法，并对川西北草原牦牛病料进行BCoV病原检测。选择BCoV聚合酶基因Nsp7-Nsp9片段设计引物，通过反应条件和体系优化，建立检测BCoV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。结果显示：所建方法特异性和重复性好，灵敏性达到1×10-2 pg·μL-1；该方法对肉牛和牦牛BCoV都有良好的检测效果，优于比较的两种以BCoV ...
猪丁型冠状病毒（PDCoV）与猪流行性腹泻病毒（PEDV）均为致病性冠状病毒，可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡。为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法，根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列，设计了两对特异性引物，分别扩增其N、M基因保守区，并将其克隆至pMD19-T载体；将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板，建立了一种...
轮状病毒(rotavirus，RV)VP6基因是RV的主要分子检测靶点，但该基因的点突变会影响RV的分子检测。本试验的目的是在研究牦牛RV VP6基因遗传变异的基础上，建立检测牦牛RV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。采用Prime 5.0设计引物，从30个牦牛腹泻样本中扩增得到14个位于931—1 338 bp牦牛RV VP6基因片段。序列分析结果发现，与牛轮状病毒（bovine rota...
用RT-PCR检测海兰褐蛋鸡禽戊型肝炎病毒
禽戊型肝炎病毒（HEV） 海兰褐蛋鸡 大肝大脾病（BLS） 基因3型
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2016/9/21
为证实我国蛋鸡群中存在禽戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV），从患有大肝大脾病的某海兰褐蛋鸡群采集粪便样品40份、血浆样品10份。提取RNA后，进行禽HEV ORF2基因片段的RT-PCR（reverse transcription PCR）检测，阳性样品进行克隆测序。同时采集疑似HEV感染鸡的肝，在两周龄SPF鸡进行了人工接种试验。结果表明，来自海兰褐蛋鸡群的40份粪便和1...
近期作者实验室从腹泻牦牛粪便样本中鉴定出一种新型星状病毒（AstV）——牦牛AstV，本研究旨在建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。首先设计引物扩增牦牛AstV 630 bp的ORF2基因片段，进行序列分析；在此基础上设计检测引物，建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。结果显示，从20份牦牛腹泻粪便中扩增出13个牦牛AstV ORF2基因片段，核苷酸相似性为99.3%～100%，而与牛肠源星...
检测施马伦贝格病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法
施马伦贝格病毒 核酸 引物 TaqMan探针 荧光定量RT-PCR
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2014/12/26
根据施马伦贝格病毒（Schmallenberg virus，SBV）S基因节段设计一对引物和TaqMan探针，建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法。通过优化反应体系和反应条件，该方法对101～107半数组织培养感染量（TCID50）的SBV核酸呈现良好的线性关系。利用德国FLI制备和保存的SBV核酸阳性（n=140）、SBV核酸阴性（n=132）和辛波血清群相关病毒核酸样品（n=16），...
旨在建立一种同时检测猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪肠道病毒9型（PEV-9）、猪嵴病毒（PKV）的三重RT-PCR法，并初步应用于临床样品检测。根据GenBank中PEDV和 PKV基因序列保守区设计2对引物，参照文献合成1对PEV-9引物，在同一体系进行RT-PCR扩增，对引物浓度、退火温度、灵敏度、特异性等进行优化，应用该法对采自四川省6个猪场46份样品进行检测。结果表明引物量分别为PEDV...
猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立
猪瘟病毒 野毒株 兔化弱毒疫苗株 RT-PCR-RFLP
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2013/12/2
本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物，建立猪瘟病毒 RT-PCR-RFLP检测方法；对20份疑似猪瘟临床样品进行检测，并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析，验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825 bp，产物经RFLP分析，野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322 bp和503 ...
猪繁殖与呼吸综合征病毒一步多重RT-PCR检测方法的建立及应用
猪繁殖与呼吸综合征病毒 一步多重RT-PCR 检测方法
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2013/12/3
本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的一步多重RTPCR检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化，从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490 bp的引物，并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测；并对田间及实验室样品进行符合率试验，对阳性样品进行重复性试验。与常规RTPCR法进行比...
猪札幌病毒TaqMan荧光定量RTPCR检测方法的建立及初步应用
猪札幌病毒 TaqMan 探针 荧光定量RTPCR
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2013/12/9
根据猪札幌病毒（Porcine Sapovirus, SaV)的VP1保守基因序列设计引物和探针，通过对荧光定量RTPCR反应条件的优化，建立了TaqMan荧光定量RTPCR检测方法，并与常规RTPCR检测方法进行了比较。结果表明，荧光定量RTPCR方法的检测灵敏度可达16.1拷贝·μL1，而常规RTPCR方法的灵敏度为1.61 ×103拷贝·μL1。对216份粪样的检测结果进一步表...
根据猪札幌病毒（Porcine Sapovirus, SaV)的VP1保守基因序列设计引物和探针，通过对荧光定量RTPCR反应条件的优化，建立了TaqMan荧光定量RTPCR检测方法，并与常规RTPCR检测方法进行了比较。结果表明，荧光定量RTPCR方法的检测灵敏度可达16.1拷贝·μL1，而常规RTPCR方法的灵敏度为1.61 ×103拷贝·μL1。对216份粪样的检测结果进一步表...
根据新城疫病毒M基因的保守序列，设计合成1对引物和TaqMan 探针,以作者实验室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株M基因阳性重组质粒为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,结合ABI公司的7300型荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测新城疫病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RTPCR方法。该方法在106～101拷贝范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中3拷贝·μL-...
应用猪瘟病毒（CSFV）及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）特异性引物和TaqMan水解探针，建立一种同时检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2 TCID50的CSFV和1.8 TCID50的北美洲型PRRSV，比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT-PCR方法对155份现地样品进行检测，结果73份为PRRSV阳性，16份为CSFV阳...