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本研究旨在研制快速检测饲料中喹乙醇的ELISA试剂盒（OLA-Kit）。作者用喹乙醇单克隆抗体（OLA mAb）建立间接竞争ELISA方法，组装OLA-Kit，并对试剂盒的性能进行评估。结果表明：OLA-Kit的标准曲线呈典型的反S型，相关系数R2 =0.976 7，线性范围为1～243 μg· L－1，半数抑制浓度（IC50）为（14.29±3.75） μg· L－1，检测限为0.79 μg· ...
间接ELISA和竞争ELISA检测小反刍兽疫病毒抗体的比较
小反刍兽疫病毒 N蛋白 间接ELISA 竞争ELISA
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2014/3/31
旨在比较检测小反刍兽疫抗体的间接ELISA和竞争ELISA方法，通过诱导表达小反刍兽疫病毒（PPRV）N蛋白，并以此作为包被抗原，检测94份绵羊和25份山羊血清样本。结果显示间接ELISA与标准竞争ELISA试剂盒的符合率为74.8%，竞争ELISA与标准竞争ELISA试剂盒的符合率为96.6%。竞争ELISA比间接ELISA方法检测结果可信度高，适于临床推广应用。
汉赛巴尔通体17-kDa蛋白的表达及间接ELISA方法的建立
巴尔通体 7-kDa蛋白 间接ELISA
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2013/11/28
为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况，作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成，然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中，构建重组质粒pET-28a-17kDa，导入大肠杆菌BL21感受态细胞中，进行诱导表达，并用Ni-NTA纯化试剂进行纯化；纯化后的蛋白应用His单抗进行鉴定。以17-kDa蛋白作为包被抗原，优化ELISA反应条件，建立检测...
ELISA与IFA用于检测J亚型禽白血病病毒的比较分析
J 亚群禽白血病病毒 酶联免疫吸附试验 间接免疫荧光试验
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2013/11/28
为比较ELISA与IFA用于检测J亚型禽白血病病毒上的差别，将5个不同梯度TCID50的NX0101病毒接种到DF-1细胞上，维持培养6个不同时间段（1、2、3、5、7和9 d），比较2种方法检测结果的相关性。试验发现接种剂量高于101.625个TCID50时，维持培养2~3 d IFA即可检出阳性结果，而ELISA检测P27抗原相对滞后2~4 d；当接种剂量低于100.625个TCID50时，维...
本研究旨在建立一种快速、简便的鸡传染性支气管炎抗体的检测方法。通过生物信息学软件对传染性支气管炎病毒（IBV）ZY3株的S1蛋白进行分析后，筛选出 4 段S1蛋白抗原表位优势区域（F1～F4），将4段表位串联成1条新基因F，对F基因编码的蛋白质进行二级结构预测，结果表明该蛋白抗原指数性高且具有良好的柔韧性。构建重组表达载体pET-32a(+)-F，并在原核表达系统中表达，获得大小为42 ku的融合...
原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M)，并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法，与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和NotⅠ酶切位点，经RT-PCR扩增得到目的基因，连接pCR®2.1载体，构建重组质粒pCR-RV-M，重组质粒用SmaⅠ和NotⅠ进行双酶...
猪肺炎支原体P46基因的原核表达与间接ELISA方法的建立
猪肺炎支原体 P46蛋白 原核表达 ELISA
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2012/8/9
猪肺炎支原体是猪喘气病的病原体，本研究选择猪肺炎支原体P46膜蛋白基因亲水区序列进行克隆，并将其内3个编码Trp的TGA突变成TGG，然后再克隆到pET28a(+)载体中，在大肠杆菌BL21（DE3）细胞内实现了高效表达，表达产物相对分子质量约为31 ku，约占菌体总蛋白35%，表达形式为包涵体，通过Western blotting证明表达产物与猪肺炎支原体高免血清具有很好的反应原性和特异性。将大...
多头带绦虫Tm7基因的表达及间接ELISA检测方法的建立
脑多头蚴 重组抗原 Tm7 间接ELISA
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2013/12/3
以多头带绦虫Tm7重组蛋白为抗原，建立动物多头蚴病早期诊断方法。本研究从羊脑多头蚴原头节提取总RNA，采用RT-PCR技术首次扩增出Tm7基因的全序列，该基因的开放阅读框为207 bp，编码68个氨基酸。将此基因克隆到pET-32a(+)载体，构建重组表达质粒pET-32a-Tm7，经转化大肠杆菌BL21（DE3）后IPTG诱导表达，用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。以纯...
在多克隆抗体的基础上研制一种用于检测动物源性食品中磺胺二甲嘧啶（SMZ）残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒，并与高效液相色谱（HPLC）分析方法比较和验证。将磺胺二甲嘧啶添加到猪肝、猪肉和鸡肉样品中，用所制备的试剂盒和HPLC分析方法检测样品中的磺胺二甲嘧啶残留，并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。研究结果表明，磺胺二甲嘧啶浓度在0.5~50 ng·mL...
新霉素阻断ELISA试剂盒的研制与应用
新霉素 单克隆抗体 阻断ELISA 试剂盒
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2013/12/3
本研究旨在建立新霉素（Neomycin，NEO）免疫学检测试剂盒。以制备的抗NEO单克隆抗体(NEO mAb)为基础，建立阻断ELISA分析方法，组装新霉素阻断ELISA试剂盒，并对试剂盒的性能进行鉴定。结果表明，NEO试剂盒(NEO-kit)标准曲线呈典型的S型，符合4参数logit曲线拟合，相关系数R2=0.990 3 ；检测范围为1.0~64.0 μg·L1，半数抑制浓度(IC50)为2....
猪圆环病毒2型Cap蛋白的表达及在ELISA中的初步应用
圆环病毒2型 Cap蛋白 间接ELISA
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2013/12/3
本研究旨在建立以PCV2 Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法，构建猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因原核表达质粒pET32aORF2并转化至Rosetta菌，在1.0 mmol·L-1 IPTG和37 ℃条件下诱导下，Cap蛋白获得高效表达，Western blot检测证实其具有免疫反应活性，以纯化的蛋白为抗原建立了检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法。结果表明抗原最适包被浓...
Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌
嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA) 检测
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2013/12/3
在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上，用斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA)检测致病性嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila，Ah）胞外蛋白酶ECPase54，同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16S rRNA基因检测72株气单胞菌分离株。结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下：DotELISA法90.3%（65/72）、脱脂奶平板法75%（54/...
猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，SS2）是一种广泛分布的人畜共患病原菌，严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因（SsnA）作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组DNA为模板，通过PCR扩增SsnA基因片段，将该片段克隆到表达载体pET-28a(+)中，在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达，获得大...
牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接ELISA方法的建立
BVDV NS3蛋白 表位串联 间接ELISA
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2013/12/3
为建立一种有效的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)抗体检测方法，作者将BVDV NS3蛋白2个抗原表位的编码核酸序列进行串联，构建重组表达载体pET30aEXnN，并在原核表达系统中表达了重组蛋白。选取包含12个表位肽的重组蛋白（rBVDVEX6N）作为包被抗原建立NS3蛋白抗体间接ELISA方法。该方法的特异性和稳定性良好，与2种商品化...