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综述了猪圆环病毒的病原特征及在流行病学、临床症状、致病机理方面的研究进展，介绍了分子生物学诊断技术在该领域的应用。
猪圆环病毒河南株的分离与鉴定
猪圆环病毒 分离 鉴定
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2009/6/12
[ 目的] 为研究猪圆环病毒的分子生物学特征和发病机理奠定基础。[ 方法] 通过无菌操作采集病猪的脾脏和淋巴结, 经胰蛋白酶
消化处理后接种PK-15 细胞, 对病毒进行分离和纯化, 并通过间接免疫荧光试验对其进行检测。[ 结果] 断奶期的发病猪被毛粗糙、消瘦、精神沉郁、食欲不振, 以5 ～10 周龄猪的症状最明显。猪生长发育明显受阻, 甚至导致死亡。从病料中和细胞中扩增出约540 bp 特...
应用猪瘟病毒（CSFV）及北美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）特异性引物和TaqMan水解探针，建立一种同时检测CSFV和PRRSV的复合荧光定量RT-PCR方法。该方法可检测到3.2 TCID50的CSFV和1.8 TCID50的北美洲型PRRSV，比常规PCR方法敏感性高50倍以上。用复合荧光定量RT-PCR方法对155份现地样品进行检测，结果73份为PRRSV阳性，16份为CSFV阳...
口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布
口蹄疫病毒 受体 整联蛋白 细胞定位
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2009/6/11
利用pcDNA3.1(+)β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞，间接免疫荧光法（IFA）检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法（IHA）检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗，FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明，pcDNA3.1(+)β6p真核表达载体...
H1N2亚型猪流感病毒HA、NP、NA、M和NS基因的克隆与序列分析
H1N2亚型猪流感病毒 NS基因 克隆 序列分析
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2009/6/11
对3株H1N2亚型猪流感病毒（SIV）：Sw/GX/17/05、Sw/HN/1/05和Sw/GX/13/06的血凝素（HA）、核蛋白（NP）、神经氨酸酶（NA）、基质蛋白（M）和非结构蛋白（NS）基因进行克隆和序列分析。结果显示：3株分离毒株HA、NP、NA、M和NS基因之间核苷酸同源性分别为91.3%~98.0%、98.4%~98.8%、97.4%~98.3%、98.8%~99.8%和98.1%...
副猪嗜血杆菌对部分常用实验动物的致病性试验
副猪嗜血杆菌 部分常用实验动物 致病性
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2009/6/11
为筛选对副猪嗜血杆菌易感的实验动物，对部分常用的不同品种、不同品系实验动物进行了副猪嗜血杆菌致病性试验。用副猪嗜血杆菌血清型5型标准株（Strain Nagasaki）培养物，以2×108~ 2×1010CFU的接种量，通过腹腔感染SPF级小鼠、大鼠、金黄地鼠、豚鼠以及清洁级豚鼠和兔。结果当接种量达到2×109CFU时，SPF豚鼠、清洁级豚鼠和SPF昆明小鼠出现死亡，在死亡豚鼠观察到典型的副猪嗜血...
高致病性猪蓝耳病病毒GS/LZh/07株的分离、鉴定及其非结构蛋白Nsp2基因特性分析
高致病性猪 蓝耳病 病毒 GS/LZh/07株
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2009/6/11
将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞，发现该病料可使Marc145细胞产生CPE, 应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV，命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因，并进行了序列测定，发现所扩增到的Nsp2基因有90个核苷酸的缺失。序列比对结果表明:该分离病毒Nsp2基因与经典毒株PRRSV-ch-1a核苷酸同源性为8...
三带喙库蚊携带猪繁殖与呼吸综合征病毒的初步证实
三带喙库蚊 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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2009/6/11
从3个临床发病猪场采集三带喙库蚊提取RNA样本，采用针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) NSP2基因设计的引物进行RT-PCR检测，并进行克隆、测序和序列分析；同时取三带喙库蚊匀浆上清接种Marc-145细胞进行PRRSV的分离与鉴定。结果表明：从三带喙库蚊提取的3份RNA样品均扩增出大小约为1 060 bp的特异性DNA条带，其序列与从相应猪场病猪分离得到的猪源PRRSV毒株高度同源，与国...
将猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪圆环病毒2型（PCV2）单感染和共感染6周龄健康仔猪，采用Real-time PCR技术对外周血单个核细胞（PBMC）中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等促炎细胞因子的mRNA表达进行定量分析。结果表明，病毒感染后，PRRSV感染组、PCV2感染组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达水平均上调，其中PRRSV感染组的IL-6、...
猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型共感染对猪体内病毒动态及免疫反应的影响
猪繁殖 呼吸综合征病毒 猪圆环病毒
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2009/6/11
将猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）单感染和共感染6周龄健康仔猪，采用实时定量PCR（Realtime PCR）对血清、组织（心、肝、肺、肾、胰、脾、胸腺、扁桃体、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结）中的PRRSV和PCV2载量进行检测，分别采用间接ELISA和间接IFA对血清中的PRRSV和PCV2特异性抗体进行检测，采用MTT法对猪外周血淋巴细胞（PBLC）的增殖能力进...
猪流行性腹泻病毒N蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析
猪流行性腹泻病毒 N蛋白 真核表达
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2009/6/11
以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板，用含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因，该PCR产物经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中，经过酶切鉴定和测序鉴定，将构建的重组质粒命名为pcDNA3.1(+)-N，且未发现碱基的缺失和插入。用脂质体法将pcDNA3.1(+)-...
采用竞争定量RT-PCR技术（qcRT-PCR）对PCV2感染组和健康对照组外周血淋巴细胞中IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ和TNF-α的mRNA转录水平进行分析。结果表明，在14和21 DPI(Days post inoculation)感染组Th1类细胞因子IL-2 mRNA转录水平分别为对照组的5.1（P<0.01）和24.0（P<0.01）倍；IL-12p40 ...
猪圆环病毒2型-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建
猪圆环病毒2型 伪狂犬重组病毒 活疫苗SA215(C)株
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2009/6/11
根据GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）序列设计一对特异性引物，采用PCR方法，扩增PCV2 ORF2基因，将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP，获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法，将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞，通过空斑纯化得到表达PCV2 ORF2...
猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定
猪 口蹄疫病毒
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2009/6/11
提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA，利用设计的引物对，分段进行扩增，获得覆盖全基因组的4个重叠片段（A、B、C和E），然后用BsmBⅠ/XmaⅠ、XmaⅠ/BamHⅠ、BamHⅠ/NotⅠ、HpaⅠ/KpnⅠ分别双酶切 A、B、E、C，并纯化回收，依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠcDNA3.1（+）转录载体内，最终得到重组质粒pPⅠ-FMDVcDNA3.1（+）；然后对该质粒进...