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梅花鹿-牛异种体细胞核移植操作方法的研究
异种体细胞核移植 盲吸法 挤压法 Demecolcine化学辅助去核 带下注核 胞质内注射
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2014/9/26
本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植（Interspecies somatic cell nuclear transfer，ISCNT）的显微操作方法进行系统研究，从而优化其操作过程。以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞，牛MⅡ期卵母细胞为受体，分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱（Demecoline，DEME）化学辅助的方法去核，带下注射（Perivitelline microinjectio...
猪手工体细胞核移植电融合/激活参数的优化
猪 卵母细胞 手工克隆 体细胞核移植
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2013/12/5
通过对猪体细胞核移植中电融合及联合化学激活对猪重构胚发育能力进行探讨，为广西巴马小型猪的手工克隆搭建平台。利用手工克隆（HMC）技术对猪体细胞核移植胚胎采用不同的电融合方法和融合后化学激活不同时间，研究猪手工克隆胚胎的发育能力。结果表明：(1) 对重构胚进行一步法电融合时，参数2（180 V· mm-1，30 μs×1次）与参数1（160·mm-1，30 μs×1次）两组间的融合率差异显著 (65...
提高山羊卵丘细胞核移植效果的研究
山羊 卵丘细胞 核移植效果
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2009/8/31
【目的】提高山羊卵丘细胞核移植效果。【方法】采用秋水仙胺提高山羊卵母细胞去核率,5-氮-2'-脱氧核苷（5-aza-dC）和曲古菌素A（TSA）影响山羊卵丘细胞核移植胚胎。【结果】0.5 μg?ml-1秋水仙胺处理山羊卵母细胞效果最好,胞质突起率达91.7%（P＜0.05）;通过比较盲吸去核法与化学辅助去核法的去核率及构建卵丘细胞核移植胚胎的体外发育能力发现,化学辅助去核法的去核率达100%,所构...
小鼠体细胞核移植研究进展
小鼠 核移植 “Honohulu”法
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2009/6/23
哺乳动物体细胞核移植的研究是当今生命科学研究的热点之一。小鼠由于其繁殖周期短、材料来源比较容易, 成为重要的模式
动物。对小鼠体细胞核移植的国内外研究现状进行了综述, 为进一步研究其他哺乳动物核移植提供了理论依据。
本研究通过脂质体介导的方法将来源于线虫C. Briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)转染至大白猪胎儿成纤维细胞。采用600 μg·mL-1 G418药物浓度，经连续10 d筛选及PCR、RT-PCR鉴定，获得11个转基因阳性细胞克隆。以体外成熟42 h的猪卵母细胞与转基因细胞构建重构胚。经体外培养后观察，转基因克隆胚胎与非转基因胚胎的卵裂率 (76.6%±4.1% vs. 81....
体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因（sFat-1）的猪胚胎
猪 sFat-1基因 胎儿成纤维细胞 体细胞核移植
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2013/12/9
本研究通过脂质体介导的方法将来源于线虫C. Briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)转染至大白猪胎儿成纤维细胞。采用600 μg·mL-1 G418药物浓度，经连续10 d筛选及PCR、RT-PCR鉴定，获得11个转基因阳性细胞克隆。以体外成熟42 h的猪卵母细胞与转基因细胞构建重构胚。经体外培养后观察，转基因克隆胚胎与非转基因胚胎的卵裂率 (76.6%±4.1% vs. 81....
本研究旨在比较水牛2种体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transfer, SCNT)方法的效果以及激活前的时间间隔对全细胞胞质内注射法(WholeCell Intracytoplasmic Microinjection, WCICSI)核移植效果的影响。采用水牛胎儿成纤维细胞作为供核，比较了透明带下注核法（Perivitelline Microinjection, PM）...
无血清培养基IVD101和G1/G2在牛体细胞核移植中的应用研究
无血清培养基 体细胞核移植 差异染色 胚胎冷冻
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2008/12/11
通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基（IVD101、G1/G2）条件下培养的囊胚发育率及其质量，从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1/G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养，并以CR1aa＋5%FBS作为对照组。无血清培养基IVD101和G1/G2的囊胚发育率与对照组无显著性差异（41.2%±9.1%、42.2%±10.8%, 48.0%±9.2%...
兔胚胎细胞核移植(克隆)的研究
克隆 兔细胞核移植 胚胎移植
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2008/10/16
该课题的创新点为：1、在卵母细胞去核过程中，对Willadsen法进行了在第一极体对面或侧面固定卵母细胞和将去核管由平面钝口改为斜面钝口的改进；2、采用将重组胚放于同源或异源胎儿成纤维细胞饲养层上做共同培养；3、应用改进的核移植程序获得了来源于16-32-细胞期胚细胞的克隆仔兔，总成功率达2.7％(3/111)。该研究达国内先进水平。
影响兔胚胎细胞核移植效率的因素
兔 核移植 胚胎
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2008/8/29
对兔胚胎细胞核移植（NT）的有关影响因素进行了系统研究。结果发现电场强度100 V·mm-1，脉冲时间15μs，电脉冲3～4次的融合率显著高于其它组（P<0.05）；融合前激活卵母细胞，分裂率和囊胚率显著高于融合后激活（P <0.05）；当用8～16-细胞胚胎的卵裂球作供核时，卵裂率和囊胚率显著高于致密桑椹胚卵裂球为供核组；当重组胚在含3%发情牛血清（OCS）的TCM199中培养48 h后，转入含...
猪卵丘扩展与卵母细胞核成熟关系的研究
成熟关系 卵母细胞核 卵丘扩展 猪
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2008/8/21
伪狂犬病是由疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科猪疱疹病毒I型的伪狂犬病毒引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。猪是本病病毒的天然宿主和贮存者,本病可引起猪严重的繁殖障碍,给我国乃至全世界的养猪业造成巨大经济损失。采取安全有效的疫苗进行免疫预防,是控制该病的主要手段。
猪胚胎细胞核移植研究
核移植 猪 胚胎细胞
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2008/6/25
该研究以杜洛克猪胚胎细胞为供体，湖北白猪卵母细胞为受体进行核移植，通过猪卵母细胞孤雌激活、体外成熟卵母细胞做受体、细胞核移植及融合、重组胚胎移植等项试验，获得核移植猪5头，并在国内首次在卵母细胞体外成熟培养液及胚胎培养液中添加半胱氨酸，以减少退化率；在激活融合液中添加细胞松弛素，以防止单倍体的产生；融合前激活卵母细胞。
猪脾细胞核ENA与染色质成分分析
可提取核抗原 染色质 成分分析 非组蛋白
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2008/5/9
猪脾细胞核可提取核抗原（ＥＮＡ）和染色质的组分分析的结果表明：两者紫外吸收光谱明显不同，ＥＮＡ呈现单一吸收峰，染色质则有两个吸收峰；ＥＮＡ中的非组蛋白（ＮＨＣＰ）含量高于染色质，而两者组蛋白（ＨＰ）含量基本相同；电泳行为显示，ＥＮＡ和染色质的ＨＰ图谱相似，但ＮＨＣＰ存在明显的差异。
研究牛皮肤成纤维细胞的处理方式对卵质内直接注射法构建的核移植胚胎发育的影响，同时比较了MⅡ期与TⅡ期卵母细胞作为受体的效果。结果表明：在细胞核注射前对供体细胞作低渗处理可明显提高胚胎构建的成功率和早期发育能力。牛皮肤成纤维细胞是否作G1/G0期同期化处理，对核移植胚胎的发育没有明显的影响。发现供核细胞在悬浮情况下作休眠处理，所得核移植胚胎的发育能力与贴附休眠的细胞基本相同，且悬浮休眠3 d后的细胞...