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韩国科学技术研究院发布消息称,该院联合韩国建国大学等机构共同研发出准确检测禽流感病毒的新方法。研究小组利用光和生物传感器技术开发出分子检测平台,此平台适用于检测各种非标记定量生物分子技术。目前的标记技术会改变病毒的性质,难以观察病毒状态。该技术利用光固有特性,具有不改变病毒性质、非接触和非破坏的特性。研究组开发的太拉赫超材料,对微量的禽流感病毒亚型病毒进行定向分析。利用太拉赫超材料的分光技术克服现...
猪鼻支原体是猪体内的一种常在菌,可引发猪的多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、心包炎等炎症。由于猪鼻支原体与猪其他支原体有较高的交叉反应,目前并没有特异性的血清学诊断方法的报道。本试验以建立猪鼻支原体特异性ELISA检测方法为目的,将猪鼻支原体的表面可变脂蛋白Vlp的特定肽段作为包被抗原,优化该方法检测条件,最终确定:其抗原的最佳包被浓度为0.312 5 μg·mL-1;一抗的最佳稀释度为1∶100,作用...
本研究旨在建立一种可同时检测8种常见牛传染病病原体(口蹄疫病毒、蓝舌病病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、产肠毒大肠杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒和小反刍兽疫病毒)的GeXP高通量快速检测方法。将多重PCR技术和毛细管电泳技术有效地结合,根据上述8种病原体的基因保守序列,设计并合成了8对特异性引物,在每对特异性引物的5'端加上一段通用引物,形成特异性嵌合引物。优化反应体系和反应条件,用...
为建立检测鸡TRIM25蛋白表达的免疫组化方法,根据发表的鸡TRIM25基因序列,设计引物,从海兰褐鸡脾中扩增TRIM25基因,构建重组原核表达质粒,通过诱导表达获得重组TRIM25蛋白,经纯化后免疫接种兔和小鼠,获得高效价血清抗体,用该抗体建立免疫组化方法,对鸡肺、脾、肝组织中TRIM25蛋白进行检测。结果显示,克隆的鸡TRIM25抗原基因大小为1 012 bp,构建的重组表达质粒能够在大肠杆菌...
马泰勒虫裂殖子表面抗原1(EMA-1)是用于马梨形虫病诊断的重要靶抗原之一。为建立实用有效的间接酶联免疫吸附试验方法,笔者根据马泰勒虫EMA-1基因序列设计并合成引物,将新疆株EMA-1全基因序列克隆于原核表达载体pGEX-4T-1上,构建pGEX-4T-1/EMA1重组质粒,转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到EMA-1融合蛋白,切胶纯化后作为包被抗原建立检测马泰勒虫抗体的rELISA...
为了建立伪狂犬病病毒(PRV)微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)的检测方法,以伪狂犬病病毒gB基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR方法。对ddPCR反应中的引物浓度、探针浓度、退火温度进行了优化。对建立的ddPCR方法的特异性和敏感性也进行测定,并且应用于临床样品的检测。结果表明,ddPCR的最佳引物浓度为0.9 μmol·L-1,探针浓度为0.25...
建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10 copies·μL-1;与猪源致病菌、病毒和其他常见...
污蝇杆菌(Wohlfahrtiimonas chitiniclastica)是一类新出现的罕见的人畜共患致病菌。2016年10月,吉林省某肉牛场一头育肥牛眼睑出现化脓病灶,使用多种抗菌药物治疗效果不佳。无菌采集病牛眼睑分泌物,进行细菌分离培养。分离菌株经培养特性、染色镜检、生化试验、16S rRNA序列分析,确定为污蝇杆菌,其对小鼠有致病性。分别用20种抗生素对分离到的菌株使用K-B纸片扩散法测定...
为切实推进国家重点研发计划“畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发”重点专项“猪重要疫病的诊断与检测新技术研究”项目(项目编号:2016YFD0500700)的组织实施,加强项目的过程管理和一体化实施,确保项目任务目标的顺利完成,6月26日-28日,项目牵头单位河南省农业科学院在洛阳市组织召开了2017年度项目推进会。中国工程院院士、河南农业大学校长张改平教授等项目咨询专家、项目负责人以及各课...
近日,国家重点研发计划课题“猪重要疫病新型检测技术研究”研究进展汇报会在我校召开。该课题自2016年启动以来,科研团队围绕猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流感病毒等猪重要疫病病原的纳米抗体库构建、荧光共振能量转移检测技术、拉曼光谱检测技术、生物传感器检测技术、微流控芯片检测技术、微阵列芯片和脐带血检测技术等内容开展研究。目前,已构建了库容良好的PRRSV的纳米抗体库并筛选到特异性优越的针对PRRSV N...
以羊圈空气微生物为研究对象,了解羊圈空气中细菌群落结构以及致病菌属特征。将来自10个不同羊场的羊圈空气样本,应用Illumina MiSeq高通量测序技术测定羊圈空气中细菌的16S rRNAV3-V4变异区序列,分析不同空气样本细菌群落组成。结果显示:空气样本中的细菌在97%的相似水平下共得到OTU个数为33 408,涵盖了25门、66纲、123目、253科、547属、444种的细菌。通过微生物多...
玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是危害动物健康的重要真菌毒素之一,笔者旨在筛选出能够有效降解ZEN的微生物,并对其降解特性以及降解产物的致毒活性进行检测,以期筛选出高效降解ZEN的菌株。以ZEN为唯一碳源进行初筛,以菌株发酵液对ZEN的降解率为复筛指标,对降解率最高的菌株进行16S rRNA基因测序分析;并对筛选出的菌株对ZEN的降解特性进行研究,对其降解产物在MCF-7细胞上进行活...
拟建立一种简便、快速、准确的现场快速分子检测方法,为猪圆环病毒2型(PCV2)疾病的生物安全防控提供技术支撑。采用交叉引物恒温扩增技术原理,根据PCV2 Cap基因设计一组交叉扩增引物,用构建的Cap基因重组质粒作为标准DNA模板,对反应体系的引物浓度、Betaine、MgSO4、dNTP、Bst酶、反应温度和时间进行优化,并结合核酸试纸条技术,建立可视化检测PCV2的交叉引物恒温扩增检测方法(P...
为了探索Ghrelin在驯鹿体内的表达及定位,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和免疫组织化学技术对其进行检测。Real-time PCR结果显示Ghrelin在所检测的17种器官中均有转录,在皱胃内的转录量最高,其次是胰、十二指肠、睾丸和食管,且转录量显著高于其他器官(P<0.05);免疫组化结果揭示Ghrelin的免疫阳性细胞在食管和皱胃内主要分布于黏膜层、黏膜下层和肌层;在...

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