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旨在探究1型鸭甲肝病毒（DHAV-1）VP3蛋白抗血清的中和活性并鉴定VP3的线性B细胞表位。利用pGEX-4T-1表达载体，在BL21(DE3)宿主菌中原核表达DHAV-1 VP3基因，以切胶纯化出的蛋白质为抗原免疫兔制备多克隆抗体，通过鸡胚中和试验对多抗的中和效价进行检测；采用Karplus&Schulz、Emini、Jameson-Wolf和Parker方法分别对柔韧性、表面可及性、抗原性及...
共表达鹅细小病毒VP3-gIL2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价 1003; 3. 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心
鹅细小病毒(GPV) VP3 鹅白细胞介素-2(IL-2) 乳酸杆菌 共表达 口服免疫 融合蛋白
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2013/11/29
笔者拟构建共表达鹅细小病毒(GPV) VP3和鹅白细胞介素-2(IL-2)的分泌性重组乳酸杆菌，评价口服表达融合蛋白GPV VP3-gIL2的重组乳酸杆菌的免疫效果。通过酶切将VP3基因和IL-2基因连接，并在其5′端连入乳酸杆菌的信号肽基因SP，亚克隆到乳酸杆菌整合表达载体pMJ67，电转化入干酪乳杆菌L.CECT5276，SDS-PAGE和Western blot法鉴定重组菌GPVVP3-gI...
鹅细小病毒VP3蛋白B细胞线性表位的精确定位
鹅细小病毒 VP3蛋白 单克隆抗体 B细胞线性表位
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2013/12/6
本试验旨在利用获得的4株抗鹅细小病毒(GPV) VP3的单克隆抗体，进一步对GPV VP3 B细胞线性抗原表位精确定位。根据笔者实验室已鉴定的线性抗原表位区结果，筛选出单抗所针对的优势抗原表位区。设计并合成互相重叠5 aa的10 aa短肽寡聚核酸片段，退火后，连入pET-32a载体，经转化鉴定，诱导表达后，获得相应的小片段融合蛋白，并利用单抗通过Western blot进行抗原性鉴定。同样方法进行...
基因枪轰击不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的动态分布
FQ-PCR pcDNA-GPV-VP3 基因枪 雏鹅 动态分布
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2008/4/1
本文开展了检测小鹅瘟病毒（GPV）VP3基因的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法的建立和基因枪轰击不同剂量（1、3和6 μg）GPV-VP3基因疫苗（pcDNA-GPV-VP3）在30日龄四川白鹅体内（心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、血液、脑及注射部位皮肤）分布规律的研究。结果表明：①建立的FQ-PCR特异性强、灵敏度高、重复性好，核酸模板数与...
抗鸡传染性法氏囊病病毒VP3单克隆抗体制备及抗原表位的初步分析
传染性法氏囊病病毒 单克隆抗体 抗原表位
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2008/3/28
用纯化的原核表达的IBDV VP3蛋白免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠，经过3次免疫后，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，经过3次有限稀释，获得分泌抗IBDV VP3抗体的4株(HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E)杂交瘤细胞系。结果表明，4株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与IBDV VP3蛋白反应，细胞上清ELISA效价均在5.0×102以上，腹水ELISA效价...
利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125 μg/mL，其中间接-ELISA 100 μL/孔、Dot-ELISA 5 μL/点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1∶200，检测血清的最适稀释度是1∶400，阳性判定标准为OD492≥0.20，且P/N≥2.0...