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X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良基因剪接受体突变对mRNA加工的影响
迟发性脊椎骨骺发育不良 SEDL基因 选择性剪接 逆转录 剪接受体
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2008/1/29
摘要X-连锁迟发性脊椎骨骺发育不良（spondyloepiphyseal dysplasia tarda, SEDL）是一种少见的由SEDL基因突变引起的骨软骨发育障碍性疾病，病变主要累及腰椎和近端承重大关节。为研究SEDL基因剪接受体突变(IVS2 -2A→C)对mRNA加工的影响，从该突变所致SEDL患者，以及健康对照者外周血中提取总RNA，逆转录合成cDNA, 以此为模板进行聚合酶链式反应（...
小鼠SmX5基因mRNA的选择性剪接
自免疫睾丸炎 差异剪接 内含子保留 snRNP相关蛋白
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2008/1/24
摘要通过RT-PCR技术，发现小鼠SmX5基因的另外3种选择性剪接体，分别命名为SmX5a、b和c。小鼠SmX5a cDNA具有完整的内含子1，而SmX5b cDNA含有部分内含子2。SmX5c的保留片断和SmX5b在相同位置起始，但保留部分延伸经过余下的内含子2。余下的DNA序列在所有内含子-外显子边界处都符合剪接的“GTAG”规则。RT-PCR的表达分析显示这3种异构体都是稳定的转录产物，均...
mRNA选择性剪接的分子机制
mRNA 选择性剪接
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2008/1/21
摘要真核细胞mRNA前体经过剪接成为成熟的mRNA，而mRNA前体的选择性剪接极大地增加了蛋白质的多样性和基因表达的复杂程度，剪接位点的识别可以以跨越内含子的机制（内含子限定）或跨越外显子的机制（外显子限定）进行。选择性剪接有多种剪接形式：选择不同的剪接位点，选择不同的剪接末端，外显子的不同组合及内含子的剪接与否等。选择性剪接过程受到许多顺式元件和反式因子的调控，并与基本剪接过程紧密联系，剪接体中...
HCMV UL97 mRNA序列特异性M1GS的构建及其体外切割活性研究
核酶P（RNase P） M1GS 人巨细胞病毒 UL97
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2008/1/21
摘要HCMV UL97基因编码一种蛋白激酶，该酶参与调控病毒DNA的复制和衣壳的形成，且序列异常保守，可作为抗HCMV治疗的重要靶位。基于HCMV UL97 mRNA T3位点附近的序列，设计一段与该位点互补的引导序列（Guide Sequence，GS），并将其与大肠杆菌核酶P催化亚基（M1 RNA）的3’末端共价连接，构建了一种序列特异性的M1GS（M1-T3）。体外试验证实，所构建的M1-T...
TPA对Bcl-X前体mRNA在U251细胞中选择性剪接调控的初步研究
Bcl-XL/Bcl-Xs 选择性剪接 灯盏花乙素
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2008/1/20
摘要 以含有部分Bcl-X序列的微小基因为研究模型，研究了TPA对Bcl-X前体mRNA选择性剪接的在体内和体外调控作用。通过RT-PCR和定点突变实验检测，结果表明PKC信号系统能调控Bcl-X前体mRNA选择性剪接，其机制可能是通过应答序列来调控Bcl-X前体mRNA 5ˊ上游和下游剪接位点的选择利用。
摘要采用相对定量反转录多聚酶链式反应（RT-PCR）的方法，以β-actin为内标，测定绍鸭排卵前卵泡F1、F3、F5及大白卵泡（LWF）颗粒层与膜层中GH受体（GHR）、IGF-I型受体（IGF-IR）和 FSH受体（FSHR）、LH受体（LHR）mRNA表达水平，以分析生长轴和生殖轴激素对绍鸭卵泡发育的协同调节作用。结果表明：在所测定的各级卵泡中，GHR mRNA在膜层的表达水平均显著高于颗粒...
特异切割番茄 1-氨基环丙烷羧酸合成酶mRNA的核酶基因序列的合成与克隆
1-氨基环丙烷羧酸合成酶 核酶
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2008/1/9
根据番茄1-氨基环丙烷羧酸合成酶(ACC合成酶)基因cDNA序列, 按照锤头状核酶作用模式, 设计合成长度分别为40mer和48mer的一对引物,经体外退火、延伸、连接,插入质粒pGEM-3Zf(+)的KpnI和BamHI位点之间,经菌落原位杂交、双酶切、聚丙烯酰胺凝胶电泳和序列分析证明,人工合成了特异切割ACC合成酶mRNA第667-669位点GUC序列的核酶基因序列。
本研究选用枸杞体细胞胚发生体系中的继代愈伤组织(对照)、胚性愈伤组织和早期胚体为实验材料,提取细胞总RNA,在12种锚定真核生物mRNA3'末端的OligodT12VN中,随机选用OligodT12GA为引物合成了以上三种材料的cDNA第一链,以此cDNA为模板,用随机引物进行PCR扩增,选择差别表达的片段。我们选用了OPA、OPH、OPK和OPB四组的60个随机引物对所得的c DNA进行了PCR...
白血病抑制因子mRNA的表达受雌激素的调控
白血病抑制因子 成骨样细胞 反转录PCR
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2008/1/7
运用RT-PCR方法检测了体外培养的大鼠成骨样细胞Ros 17/2.8在17β雌二醇(E2)刺激前后细胞中一些细胞因子的mRNA水平。发现在E2刺激后，细胞中白血病抑制因子(LIF)的mRNA水平明显上升，且呈现E2浓度依赖的特点。该结果提示，LIF可能参与替代性治疗过程中雌二醇对于骨质硫松症的缓解作用。这为进一步研究细胞因子与骨质疏松症的相关性，阐明细胞因子在骨代谢中的作用打下了基础，并将有利于...
摘要 转化生长因子β是一种细胞多功能调节肽,目前研究认为其和促癌过程有密切关系。本文利用Northern印迹分析技术研究了TGF-β mRNA在促癌物佛波酯刺激的小鼠表皮和化学性诱发的小鼠二阶段皮肤肿瘤中的表达情况。结果证明,巴豆油2—20 μL和TPA 5—40nmol一次局部涂用于小鼠皮肤,均可明显增加小鼠表皮TGF-β mRNA,呈较好的浓度依赖性。TGF-β mRNA表达在二甲基苯蒽(DM...
脂肪酸合成酶基因片段克隆以及胰岛素诱导时该酶mRNA含量的变化
脂肪酸合成酶 cDNA克隆 鼠肝 胰岛素诱导FASmRNA
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2008/1/5
摘要 采用高效的由mRNA合成cDNA的方法,我们得到了含有3.7kb的脂肪酸合成酶基因片段的克隆pFAS_(203)。它具有限制内切酶PstⅠ、BamH Ⅰ、HineⅡ、PvuⅡ、Ava Ⅰ以及Pvu Ⅰ酶切位点,与已经得到的经杂交选择的mRNA离体翻译产物鉴定的cDNA克隆pFAS_(15)有部分重叠。对饥饿的糖尿病大鼠注射胰岛素并饲以无脂食物,肝中FAS mRNA以及其前体RNA含量增加,当...
摘要 用改进的LiCl沉淀法和寡聚(dT)-纤维素亲和层析法由猪垂体制得总mRNA。在兔网织红细胞无细胞翻译体系中进行体外翻译的结果表明,制得的总mRNA具有一定的翻译活力。翻译产物与兔抗猪生长激素抗血清发生免疫沉淀,沉淀物占总翻译产物的10％左右。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果表明翻译产物有一条很深的带,分子量约为24,000道尔顿,与猪前生长激素的分子量相近。以制备的mRNA为模板反转录合成了...
采用原位杂交和RNA点杂交方法，观察了一种新的端粒相关锌指基因TASL30在早期人胚与50种器官组织中的mRNA表达。结果表明，TASL30基因在早期人胚神经管中有明显表达，其中在神经管的头端表达最强，而在人的50种器官组织中均未检测到该基因的明显表达。另外通过G－显带和染色体原位杂交，将TASL30基因定位于人染色体12q24～qter。
摘要 本文报道了应用DNA重组和分子克隆技术研究雄激素与大鼠储精囊分泌蛋白基因的相互作用。大鼠储精囊总mRNA在逆转录酶作用下合成dsc-DNA,并克隆于pBR322/X1776中。经原位杂交法筛选含有互补于雄激素调节的mRNA的三个克隆株,其中二株经信使选择杂交翻译法证实它们是编码54K和16.6K道尔顿的分泌蛋白质的基因。同时应用后者的cDNA作为探针进一步研究雄激素对处于不同生理态状下的大鼠...